X线照射对NADH脱氢酶活性和mtDNA复合物Ⅰ基因序列的影响

摘要

目的：
　　1探讨不同剂量X线照射对人食管鳞癌Ec9706细胞NADH脱氢酶活性的影响。
　　2.分析6GyX线照射对线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)复合物I(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5)6种基因序列的影响。
　　方法：
　　1.将人食管鳞癌细胞株EC9706进行体外培养，分别用2Gy、4Gy、6Gy、8Gy五个剂量照射。照射之后提取线粒体并测定线粒体酶活性，选取最佳剂量组。
　　2.用6GyX线照射Ec9706细胞后，提取mtDNA，利用PCR技术扩增，纯化PCR产物，并将PCR产物回收，纯化。
　　3.对mtDNA的ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND56种基因进行基因测序。
　　4.并用DNA序列分析软件对ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5的变异情况进行对比分析。
　　结果：
　　1.据统计结果分析:经2Gy、4Gy、6Gy、8Gy不同剂量照射后，各组之间NADH脱氢酶活性有显著性差异(P＜0.05)，6Gy组NADH脱氢酶活性显著低于其它四组(P＜0.01)。
　　2.经6GyX线照射后，mtDNA的ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND56种基因序列没有变化。
　　结论：
　　1.经2Gy、4Gy、6Gy、8GyX线照射后，Ec9706细胞NADH脱氢酶活性都低于未照射组，从2Gy到6Gy，随着剂量增加酶活性逐渐降低，在6Gy剂量时降到最低，当剂量逐渐增大到8Gy，酶活性虽然低于对照组，但不再继续降低。进一步证实了照射可以影响线粒体的氧化磷酸化功能。
　　2.6GyX线照射对Ec9706细胞mtDNA复合物I(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5)6种基因序列没有造成影响。

目录

声明

摘要

前言

材料

1 标本

2 主要仪器设备

3 主要实验试剂

实验方法

1．Ec9706细胞的复苏

2．Ec9706细胞换液

3．Ec9706细胞的传代

4．照射条件

5．线粒体制备

6．Ec9706细胞线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ活性的测定

7．Ec9706细胞mtDNA的提取

8．mtDNA浓度和纯度的测定

9．mtDNA聚合酶链式反应(PCR)

10．PCR 50μL反应体系如下

11．PCR产物回收、纯化

12．ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5基因进行PCR测序

13．统计学方法

结果

1 辐射后细胞线粒体活性统计学方差分析结果

2 同NCBI标准的基因序列进行对比结果如图2

讨论

结论

参考文献

综述 食管癌的治疗进展

个人简历

致谢