子宫内膜腺癌中SOX17基因甲基化与β-catenin mRNA表达的关系

摘要

研究背景与目的：
　　子宫内膜癌(Endometrial Carcinoma，EC)是常见的发生于子宫内膜上的一组上皮性恶性肿瘤，以腺癌最多见。近年来，其发病率有明显的增加并呈现年轻化的世界趋势。在一些欧美等发达国家，其发病率已位居女性生殖道恶性肿瘤的首位，对广大女性的健康和生命造成严重威胁。因此，探索子宫内膜癌的发生、发展机制，对子宫内膜癌患者及早做出准确的诊断和有效的治疗，为其预后延长生存期和提高生活质量有很大帮助。但目前关于子宫内膜癌的具体发病机制仍不是十分明确，近年来许多研究表明表观遗传机制与其发生发展有关。
　　表观遗传学机制是指不依赖DNA碱基序列的改变而能够影响基因转录过程，进而使基因表达水平发生了可稳定遗传并可逆的变化。DNA甲基化是一种重要的表观遗传学修饰机制，尤其是抑癌基因启动子区域CpG岛的甲基化引起其表达的下调或缺失，在人类多种恶性肿瘤发展过程中发挥重要作用，使得DNA甲基化成为肿瘤研究中的热点之一，并有希望成为早期诊断恶性肿瘤的一个有临床价值的潜在指标。
　　SOX17作为SOX家族的成员之一，它在胚胎发育的内胚层分化中起关键的作用，但其具体的作用机制还不是很清楚。最近的研究显示SOX17基因可能作为Wnt信号通路的拮抗因子，对许多人类恶性肿瘤的发生和发展过程发挥肿瘤抑制基因的功能。β-连环蛋白(β-catenin)是一种具有多重功能的细胞内糖蛋白，在正常细胞内呈低表达，而在肿瘤细胞的细胞核内大量积累，引起Wnt通路的异常激活。目前研究认为β-连环蛋白具有癌基因的功能，参与多种恶性肿瘤的发展过程。既往有研究表明子宫内膜癌的发生与Wnt信号通路有关，我们的前期研究证实了SOX17基因在子宫内膜腺癌中的蛋白表达及甲基化情况，其蛋白表达水平下降，但是，关于SOX17基因启动子甲基化情况与Wnt通路关系的研究尚未见报道，其具体的信号通路激活机制尚不明确。
　　因此，本研究的目的是通过检测SOX17和β-catenin基因在子宫内膜腺癌中的mRNA表达水平，以及SOX17在子宫内膜腺癌中的甲基化情况，探讨其mRNA表达与SOX17甲基化的关系，为进一步探讨SOX17基因与Wnt/β-catenin信号通路的关系提供实验依据，并且为子宫内膜癌的发生机制提供一种新的参考思路。
　　研究对象与方法：
　　1.实验材料
　　1)细胞来源:本研究中所用的子宫内膜腺癌细胞株AN3CA（低分化）、HEC-1A（中分化）均由郑州大学第一附属医院重点实验室馈赠。
　　2)组织标本来源:
　　子宫内膜腺癌组织和正常内膜组织:收集2011年10月-2013年12月间郑州大学第二附属医院妇科行全子宫切除的子宫内膜腺癌组织40例和正常增生期子宫内膜组织10例。
　　健康女性外周血血液样本:收集2013年07月-2013年12月间在郑州大学第二附属医院体检的健康女性外周血样本5例。
　　2.实验方法
　　1)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测SOX17和β-catenin基因的mRNA表达情况，用GAPDH作为内参。
　　2)甲基化特异性PCR(MSP)法检测SOX17基因的甲基化情况。
　　3.统计方法
　　将实验数据输入SPSS17.0软件，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组样本的均数比较采用两个独立样本t检验，多组样本间均数比较采用单因素方差分析;两变量的相关性分析采用Pearson相关。定性资料的组间的比较采用X2检验或x2检验的连续性校正，以P＜0.05差异有统计学意义。以α=0.05为检验水准。
　　结果：
　　1.在子宫内膜腺癌组和正常增生期内膜组中SOX17基因mRNA的相对表达量分别为0.24±0.04、1.01±0.17，β-catenin基因的mRNA相对表达量分别为4.17±0.37、1.03±0.28，差异均有统计学意义(P＜0.05)。并且SOX17和β-catenin mRNA表达均与肿瘤的病理分级和肌层浸润深度相关(P＜0.05)，与患者年龄，肿瘤临床分期等临床病理学资料之间均无统计学意义(P＞0.05)。
　　2.子宫内膜腺癌组织中SOX17和β-catenin的mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.631，P=0.001)。
　　3.两种子宫内膜腺癌细胞株AN3CA、HEC-1A中SOX17基因均表现为完全甲基化状态。
　　4.SOX17基因在子宫内膜腺癌组织的甲基化率为77.50％(31/40)，其中20例为完全甲基化，11例为部分甲基化;在正常增生期内膜组的甲基化率为10.00％(1/10)，表现为部分甲基化。SOX17的甲基化率在子宫内膜腺癌组显著高于正常增生期内膜组，差异具有统计学意义(x2=13.026,P＜0.01)。SOX17基因CpG岛甲基化与子宫内膜腺癌的病理分级(P=0.007)和肌层浸润深度(P=0.035)有关，而与年龄，临床分期均无明显相关性（P＞0.05）。
　　5.在发生SOX17基因CpG岛甲基化的子宫内膜组织和SOX17非甲基化的子宫内膜组织中，SOX17基因的mRNA表达量分别为0.25±0.14、0.64±0.40，β-catenin基因的mRNA表达量分别为4.13±0.69、2.49±1.50，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1.SOX17基因启动子区CpG岛的异常甲基化在子宫内膜腺癌发生过程中是一个频发的分子事件。
　　2.子宫内膜腺癌中SOX17基因启动子区CpG岛的异常甲基化可能是导致其基因表达下调，并引起β-catenin基因表达上调，进一步激活Wnt/β-catenin信号通路的一种重要机制。
　　3.SOX17基因CpG岛甲基化状态与子宫内膜腺癌的病理分化程度和肌层浸润深度相关，说明其可能在子宫内膜腺癌的进展过程中发挥作用，并可能作为一个有临床价值的分子生物学指标。

目录

声明

摘要

引言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述 DNA甲基化与子宫内膜癌关系的研究进展

缩略词索引

个人简历

在校期间发表的学术论文

致谢