LIF在胎盘及血浆中的表达与子痫前期的相关性分析

摘要

背景：
　　妊娠期高血压疾病(hypertensive diseases complicating pregnancy,HDCP)是一种病因至今尚未明确的严重危害母婴健康的妊娠特有的疾病。据报道，全世界每3分钟就有一位孕妇因子痫前期和子痫而致死，其是导致孕产妇围产期患病率和死亡率升高的主要原因之一。目前普遍认为HDCP的发生是多种因素综合作用的结果，但胎盘因素是其主要的病因之一。滋养细胞是构成胎盘的主要结构，其浸润能力下降导致的胎盘浅着床可能是子痫前期和子痫发生的重要病理基础。
　　白血病抑制因子（1eukemia inhibitory factor,LIF）是拥有多种生物学效应的属于IL-6家族的一种细胞因子，它可通过多种途径作用于许多不同的细胞类型，其在妊娠的整个过程中几乎都起着作用。
　　妊娠的生理过程受到许多来自母胎界面的细胞因子的调节，研究表明LIF在胚胎植入过程中起到至关重要的作用。而人类胚胎植入的过程非常复杂，受到多种因素的影响，其实质是滋养细胞对子宫内膜基质的侵入从而完成血管重铸。研究证实，LIF可通过多种途径影响滋养细胞的浸润能力，从而有利于妊娠的维持，其表达失调时可引起病理妊娠。当LIF表达下降时，可导致滋养细胞浸润能力下降、胎盘浅着床，从而导致了HDCP的发生;而当LIF表达升高时，可导致滋养细胞肿瘤的发生。目前国内外关于LIF在HDCP中的研究甚少，因此，其在HDCP的发病机制中所起的作用也显得尤为重要。
　　目的：
　　通过采用免疫组化SP法及酶联免疫吸附测定法(ELISA)对子痫前期患者和正常妊娠孕妇胎盘组织及血浆中LIF蛋白的表达情况进行检测，进而分析其在子痫前期患者胎盘及血浆中的表达情况及与新生儿体重、胎盘重量之间的相互关系，以及胎盘与血浆中LIF蛋白表达水平之间的相互关系。初步探讨子痫前期发病机制中LIF蛋白所起的作用及对围产儿结局的影响，从而为HDCP的发病机制提供一定的理论基础，并为妊高症的管理方面提供新的思路和方法。
　　资料及方法：
　　1、对象
　　取郑州大学第二附属医院产科2012年7月至2013年5月期间住院分娩的子痫前期(preeclampsia，PE)患者60例（PE的诊断标准参照第7版乐杰主编的人民卫生出版社出版的《妇产科学》）。按疾病严重程度将子痫前期患者分为轻度子痫前期(Mild preeclampsia,MPE)组和重度子痫前期（Severe preeclampsia,SPE）组，各30例，同时随机抽取同期住院分娩的健康孕妇30例。所有入选患者均排除妊娠期糖尿病、妊娠期肝内胆汁淤积症、慢性内外科疾病等妊娠特发合并症，高血压、糖尿病、心脏病等原发性慢性病史，胎膜早破、羊水过多或过少、胎盘早剥等妊娠合并症。所有研究对象均为单胎妊娠、自然受孕，产前无明显宫缩、妊娠结局均为剖宫产（手术指征为:社会因素、臀位、横位、子痫前期等）。其中，子痫前期患者均为晚发型子痫前期，即发病于孕34周后。
　　2、方法
　　(1)当胎盘娩出后，立即取避开大血管和钙化点的大小约1cm×1cm×1cm的脐带附着处，胎盘母体面的胎盘组织，随后用生理盐水将其冲洗干净，然后以10％福尔马林液进行固定，石蜡包埋后切取4μm切片。随后采用HE及免疫组织化学SP法对胎盘组织中LIF蛋白的表达情况进行检测。本实验利用图像采集分析系统对LIF蛋白的表达水平进行测定，且以平均光密度值对结果进行半定量表示。新生儿体重的测定，待新生儿脐带处理完毕后进行。胎盘重量的测定，待减去胎膜与脐带(脐带残留需＜2cm)且胎盘表面的凝血块及附着血液擦拭干净后进行，单位均精确到克(g)。
　　(2)所有研究对象均于入院当日空腹抽取肘静脉血4ml，置于3.8％枸橼酸抗凝管中，于30min内以3000r/min的速度离心15min，分离血浆后，分装保存于-80℃冰箱中待测。
　　(3)实验结果的分析采用SPSS17.0统计软件，一般计量资料用x±s表示，符合正态分布、总体方差齐的多组定量资料间的比较，采用ANOVA分析;符合正态分布的两组定量资料间的相关性分析，采用Pearman相关分析，检验水准为α=0.05，当P＜0.05时有统计学意义。
　　结果：
　　1、三组研究对象在年龄、孕周方面的差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　2、LIF蛋白在三组胎盘组织中的平均光密度值分别为:对照组:158.13±26.49，MPE组:129.28±29.54，SPE组:97.86±24.39。三组间两两比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　3、LIF蛋白在三组血浆中的含量分别为:对照组:643.69±243.13,MPE组:409.13±157.50，SPE组:373.34±156.73。其中，对照组分别与MPE组、SPE组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。但SPE组与MPE组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　4、三组新生儿体重分别为:对照组:3342.67±381.08g，MPE组:3082.30±328.59g，SPE组:2763.00±437.80g。三组间两两比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　5、三组胎盘重量分别为:对照组:553.90±70.52g，MPE组:514.97±56.68g，SPE组:455.93±73.39g。其中，SPE组分别与对照组、MPE组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)。但MPE组与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　6、LIF蛋白的表达水平随着子痫前期病情的加重而呈逐渐下降的趋势，其中SPE组患者胎盘及血浆之间的表达水平存在正相关(r=0.380，P＜0.05)，而对照组及MPE组之间不存在明显的相关性(P＞0.05)。三组胎盘组织中LIF蛋白的表达水平与胎盘重量、新生儿体重均呈显著正相关（正常妊娠组分别为:r=0.435，P＜0.05;r=0.557，P＜0.05。MPE组分别为:r=0.475，P＜0.05;r=0.573，P＜0.05。SPE组分别为:r=0.389，P＜0.05;r=0.454，P＜0.05）。三组血浆的LIF蛋白含量与胎盘重量、新生儿体重均呈显著正相关（正常妊娠组分别为:r=0.409,P＜0.05;r=0.532，P＜0.05。MPE组分别为:r=0.465，P＜0.05;r=0.503，P＜0.05。SPE组分别为:r=0.698，P＜0.05;r=0.730，P＜0.05）。
　　结论：
　　1、LIF蛋白在胎盘及血浆中的表达水平随着妊娠期高血压疾病严重程度的增加呈现逐渐下降的趋势，提示其可能与子痫前期的发病相关。
　　2、LIF蛋白在重度子痫前期患者血浆及胎盘中的表达呈显著正相关，而在正常妊娠组及轻度子痫前期组中表达无相关性，推测血浆LIF蛋白可能来自胎盘。
　　3、LIF蛋白在胎盘及血浆中的表达水平与新生儿体重、胎盘重量均呈显著正相关，提示LIF蛋白的表达情况可能直接影响围产儿的结局。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照表

前言

材料与方法

1．1 研究对象的选取及分类

1．2 标本的采集

1．3 免疫组织化学SP法半定量检测胎盘组织中LIF的表达水平

1．4 ELISA法定量检测人血浆中的LIF的含量

1．5 统计方法

结果

2．1 正常妊娠组和子痫前期组年龄、孕周的比较

2．2 LIF蛋白在三组胎盘组织中的分布、定位

2．3 LIF蛋白在三组胎盘组织中的表达水平

2．4 LIF蛋白在血浆中含量的比较

2．5 正常妊娠组和子痫前期组新生儿体重、胎盘重量的比较

2．6 各研究指标的变化趋势及相关性

讨论

3．1 白血病抑制因子及其受体简介

3．2 白血病抑制因子及其受体与正常妊娠

3．3 白血病抑制因子及其受体与子痫前期

3．4 LIF和新生儿体重、胎盘重量的相互关系

3．5 前景与展望

结论

参考文献

附图

综述 LIF与妊娠期高血压疾病关系的研究进展

个人简历

致谢