酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测抗核小体抗体的方法学比较

摘要

目的：
　　系统性红斑狼疮( Systemic Lupus Erythematosus, SLE)是一种以出现多种自身抗体伴多系统损害为特征的自身免疫性疾病( Autoimmune disese, AID)。目前临床诊断SLE的自身抗体主要有抗核抗体( Antinuclear antibodies, ANA)、抗双链DNA抗体( Anti-double stranded DNA, ds-DNA)、抗Sm抗体、抗组蛋白抗体( Anti-histone antibody，Anti-His)、抗核小体抗体( Anti-nucleosome antibody, AnuA)等多种自身抗体。核小体是组成真核生物染色质的基本单位，其核心是由DNA和四对组织蛋白组成的复合物，AnuA是以核小体为靶抗原，由活化的B细胞产生的自身抗体，在SLE的诊断中有重要意义。目前实验室检测AnuA的方法主要有免疫印迹法（Western blotting，WB）和酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。WB是依据抗原抗体的特异性结合检测样品中蛋白质的方法，此法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术的基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，用于体外定性检测血清或血浆中的人抗核小体的IgG类抗体，操作比较简便；而ELISA是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯丙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。因为不同的检测方法会导致实验室检测结果有差异，为客观评价ELISA和WB两种实验方法的性能，本研究分别应用此两种方法检测抗核小体抗体，比较其差异并结合临床诊断对两种方法进行对比分析，为临床工作寻找合适的检测方法。
　　方法：
　　收集郑州大学第一附属医院2013年3月-2013年9月患者血清818例，男性182例，女性636例，年龄在8岁–80岁,平均（42.4±17.3）岁。按照临床诊断将病例分为SLE组与非SLE组，SLE组360例，非SLE组458例。SLE的诊断依据2009年系统性红斑狼疮国际临床协作组( systemic lupus international collaborating clinics, SLICC)在美国风湿病学学会( American College of Rheumatology, ACR)1997年SLE分类标准的基础上新的修订标准，非SLE的各类疾病均符合相应的国际分类诊断标准。
　　采用SPSS17.0统计学软件对数据进行分析。ELISA与WB检测AnuA的阳性率比较采用卡方检验，2种方法诊断SLE的准确度比较采用卡方检验，敏感性和特异性比较采用ROC曲线分析，曲线下面积比较采用Z检验。P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1．阳性率方面，ELISA与WB检测AnuA的阳性率分别为35.1％和31.1%，二者差异有统计学意义（P<0.05)。
　　2．准确度方面，以SLE的临床诊断为金标准，ELISA与WB检测结果诊断SLE的准确性分别为84.7%和83.1%，差异无统计学意义(P>0.05)。
　　3．敏感度和特异度方面，ELISA检测AnuA的敏感度为72.5%，特异度为93.2%；WB检测AnuA的敏感度为66.1%，特异度为96.5%。ELISA与WB检测AnuA的ROC曲线下面积分别为0.840和0.813，差异无统计学意义（P>0.05)。
　　结论：
　　ELISA与WB检测AnuA的总一致率高，对SLE诊断的准确度较高，敏感度和特异度均较好。应用WB进行AnuA检测的初筛，需要时应用ELISA进行复检，可以提高6.4%的AnuA检测阳性率，为临床提供更好的SLE诊断及疾病活动度的信息。

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英文缩略词表

前言

材料和方法

1 实验材料

1.1 实验对象

1.2 实验试剂

1.3 实验仪器及材料

1.4 试剂的配置

2 实验方法

2.1 标本采集

2.2 ELISA法

2.3 WB法

2.4 统计学分析

结果

1 ELISA和WB 2种方法检测结果

2.3 ELISA和WB检测AnuA结果分析

讨论

1 AnuA在SLE中的意义

2 WB和ELISA检测AnuA

小结

参考文献

综述:系统性红斑狼疮自身抗体的研究新进展

个人简历

致谢