金黄色葡萄球菌分子特征及耐药相关分子标志

摘要

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是目前全球范围内引起人类感染性疾病的主要病原微生物之一，简称金葡菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococeus aureus，MRSA)的出现是由于甲氧西林敏感金葡菌(Methicillin-sensitiveStaphylococcus aureus，MSSA)获取了葡萄球菌盒式染色体（StaphyloccoccalCassette Chromosomemec，SCCmec）元件。成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered RegularlyInterspacedShort Palindromic Repeat，CRISPR)是最近发现的针对噬菌体等外源基因的细菌免疫系统。
　　目的:
　　1.了解分离的金葡菌耐药性、耐药基因分布及分子特征。
　　2.了解郑州地区分离的金葡菌spa和MLST主要流行型别，揭示该地区金葡菌分子流行病学特征。
　　3.了解CRISPR/Cas系统的cas核心基因cas1和cas2的分布情况，初步探索金葡菌cas1和cas2与金葡菌耐药关系。
　　方法:
　　1.采用最低抑菌浓度（MIC）对分离的金葡菌进行25种药物敏感试验。
　　2. PCR方法扩增介导β-内酰胺类、氨基糖苷类、红霉素、四环素等药物耐药的11种耐药基因及cas1，cas2基因，并测序分析。
　　3.多重PCR方法对MRSA进行SCCmec分型。
　　4. PCR方法进行金葡菌 spa分型，PCR产物经测序确定spa型别。PCR扩增MRSA7个管家基因，PCR产物经测序后通过查找数据库确定ST型别。
　　5.不同菌株耐药表型、基因型以及 cas1，cas2基因分布以百分率描述。采用SPSS21.0软件进行统计学分析。MRSA和MSSA敏感率、耐药基因的阳性率比较以及菌株耐药表型、耐药基因型、SCCmec分型与cas1，cas2基因关联性采用χ2检验或Fisher确切检验。
　　6.利用DNAstar7.0软件的MegAlign进行序列比对同源性分析并构建系统发育树。
　　结果:
　　1.分离的86株金葡菌中，MRSA共28株，MSSA共58株。青霉素耐药率最高，为95.35％，耐药率大于50%的有11种。MRSA菌株对19种抗菌药物的耐药率均高于MSSA菌株。
　　2.对86株金葡菌菌耐药基因检测，acc(6')/aph(2'')、aph(3')-III、ant(4',4

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英文缩略词

1 引言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 金黄色葡萄球菌耐药性结果

3.2 金黄色葡萄球菌分型结果

3.3 CRISPR相关蛋白cas1和cas2基因

4 讨论

4.1 金黄色葡萄球菌总体耐药情况

4.2 金黄色葡萄球菌对各类抗生素的耐药基因分析

4.3 金葡菌分子分型

4.4 金葡菌中CRISPR相关基因cas1和cas2检测

5 结论

参考文献

综述： 金黄色葡萄球菌基因水平转移机制的研究进展

附录

个人简历

致谢