肺炎链球菌脑膜炎大鼠脑组织AQP4和occludin的表达及地塞米松的干预影响

摘要

前言：
　　细菌性脑膜炎是婴幼儿常见的中枢神经系统感染性疾病，致死致残率高，严重影响患儿生命健康。最常见的致病菌是脑膜炎双球菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌。脑水肿导致的颅内压增高是细菌性脑膜炎患儿不良结局的一个重要因素，其发生机制复杂。血脑屏障通透性的改变是导致脑水肿的重要因素。紧密连接是血脑屏障的重要结构基础，occludin是紧密连接中最重要的跨膜蛋白质之一，对BBB的维持起重要作用。水通道蛋白-4（aquaporin-4，AQP4）是脑组织中表达最高的水通道蛋白，其表达变化直接影响血脑屏障通透性，目前已成为分子水平研究脑水肿发生机制的热点问题。血脑屏障与AQP4、occludin的关系提示治疗血脑屏障异常引起的疾病可以从影响相应蛋白入手。目前细菌性脑膜炎时脑组织不同时相AQP4、occludin表达如何？地塞米松治疗是否对其产生影响？尚不清楚。
　　目的：
　　建立肺炎链球菌脑膜炎动物模型，探讨肺炎链球菌脑膜炎大鼠脑组织AQP4、occludin不同时相的表达变化及地塞米松干预对其的影响。
　　材料与方法：
　　1.脑膜炎模型大鼠制备
　　采用肺炎链球菌菌株和等量的生理盐水脑池内注射，建立3周龄大鼠细菌性脑膜炎模型和正常对照模型.
　　2.40只清洁级3周龄SD大鼠随机分为生理盐水对照组、感染后24h组、48h组和5d组。
　　3.另取40只清洁级3周龄SD大鼠随机分成4组：生理盐水对照组、脑膜炎模型未治组、头孢曲松治疗模型组、头孢曲松加地塞米松治疗模型组。
　　4.各组动物在规定的时间处死，断头取脑，其中一半干湿重法称重，一半多聚甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋。
　　5.应用S-P免疫组织化学法和Western blot法分别检测水孔蛋白AQP4和紧密连接蛋白Occludin的表达变化。
　　6.原位杂交检测各组脑组织AQP4mRNA的表达。
　　结果：
　　1.成功制备肺炎链球菌脑膜炎大鼠模型。
　　2.链球菌感染后48h脑组织水肿程度最重。48h组与24h组、5d组相比均有统计学意义(P<0.05)；
　　3.链球菌感染大鼠中枢神经系统后，脑组织中AQP4及AQP4mRNA表达24 h开始上升，48 h达峰值，5d时降低，但仍高于生理盐水对照组，各组相比差异有统计学意义(P<0.05)；脑组织含水量与 AQP4表达之间呈显著正相关， r=0.864，P<0.01。
　　4.链球菌感染大鼠中枢神经系统后，脑组织中Occludin表达24 h开始降低，48 h达峰值，5d时开始升高，但仍低于生理盐水对照组，各组相比差异有统计学意义(P<0.05)；
　　5.地塞米松加头孢曲松治疗组AQP4及AQP4mRNA表达低于单用头孢曲松治疗组(P<0.05)，与生理盐水对照组相比无统计学意义(P＞0.05)；
　　6.地塞米松加头孢曲松治疗组Occludin蛋白表达高于单用头孢曲松治疗组(P<0.05)，与生理盐水对照组相比无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论：
　　1.细菌感染中枢神经系统后，AQP4表达增高且有先增高后下降规律，提示AQP4参与了感染性脑水肿的发生发展过程；
　　2.细菌感染中枢神经系统后，Occludin表达降低且有先下降后增高规律，提示Occludin AQP4参与了感染性脑水肿的发生发展过程；
　　3.地塞米松治疗能影响细菌性脑膜炎大鼠脑组织 AQP4及 AQP4mRNA、Occludin蛋白表达,此可能为其早期应用对中枢神经系统保护机制之一。

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前言

参考文献

第一部分 肺炎链球菌脑膜炎大鼠脑组织中水通道蛋白-4的表达变化

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

5 参考文献

第二部分 地塞米松对肺炎链球菌脑膜炎大鼠脑组织水通道蛋白4表达的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨 论

4 结论

参考文献

第三部分 肺炎链球菌脑膜炎大鼠脑组织Occludin蛋白表达变化的研究

1 材料和方法（详见第一部分）

2 结果

3 讨论

4 结论

5 参考文献

第四部分 地塞米松对肺炎链球菌脑膜炎大鼠脑组织

1 材料和方法（详见第一部分）

2 结果

3 讨 论

4 结论

5 参考文献

第五部分 总结

综述 血脑屏障通透性变化的研究进展

个人简历、在读博士期间发表的学术论文与研究成果

致谢