全反式维甲酸对食管癌细胞系Eca109VEGF和bFGF表达的影响

摘要

背景:
　　食管癌是发病率较高、预后较差的实体肿瘤之一。肿瘤直径小于1mm时，可以通过自身渗透作用为之提供营养，当肿瘤直径达到1-2mm时，肿瘤内部发生了血管的新生现象，可以为肿瘤的生长提供充足的营养，新生血管可以促进肿瘤的发展、浸润和转移。多种生长因子共同参与调节着肿瘤血管的生成。其中我们研究最为广泛和深入的生长因子是血管内皮生长因子（VEGF），主要调控着肿瘤血管的生成，促进了多种恶性肿瘤的生长、转移。另一类较大的生长因子家族是成纤维生长因子（FGF）家族，其中bFGF是第一个被鉴定的促血管生成因子，在血管生成中也起着重要的调节作用。
　　诱导分化概念的提出，为肿瘤的治疗提供了一种新的、有效的治疗理念。越来越多的肿瘤专家开始关注诱导分化治疗的研究进展。全反式维甲酸（ATRA）作为一种最重要的诱导分化剂，已经在白血病及部分实体肿瘤中得到应用。本研究通过体外实验观察ATRA对食管癌细胞系Eca109中VEGF、bFGF蛋白和mRNA表达的影响，为ATRA在食管癌抗血管生成的治疗提供理论依据。
　　目的:
　　研究不同浓度ATRA对食管癌细胞系Eca109 VEGF和bFGF表达的影响。
　　方法:
　　终浓度分别为0、1、5、10μmol/L的ATRA作用于人食管癌Eca109细胞，采用噻唑蓝比色法（MTT）评价药物对细胞的增殖抑制情况；通过划痕实验测定ATRA作用于Eca10948h前后的迁移能力；采用细胞免疫组织化学法和逆转录酶聚合链式反应（RT-PCR）分别检测不同浓度ATRA作用于Eca10948h后VEGF、bFGF蛋白和mRNA的表达情况。
　　结果
　　1．MTT结果：作用于24h后，实验组，即1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L组的增殖抑制率分别为：（44.57±1.36）％、（50.26±1.64）%、（54.24±1.39）%；48h后，上述实验组的增殖抑制率分别为：（54.29±0.15）%、（59.52±0.74）%、（65.45±4.33）%；72h后，上述实验组的增殖抑制率分别为：（66.39±0.87）%、（74.33±2.69）%、（85.24±1.49）%。而对照组，0μmol/L组三个时间点的抑制率均为0.00%。经统计学分析，各个实验组分别与对照组相比，差异均具有统计学意义（ P<0.05），且实验组之间进行两两比较，差异也具有统计学意义（P<0.05）。
　　2．划痕实验结果：1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca10948h后，细胞的迁移率分别为（50.82±1.61）%，（46.80±5.12）%，（32.31±3.25）%，对照组（68.81±2.64）%。0h各组细胞的迁移率均为0.00%。实验组数据分别与对照组相比，差异均具有统计学意义（P<0.05），且实验组之间两两比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　3．免疫组化结果：VEGF蛋白阳性表达体现为细胞内出现的棕黄或棕褐色颗粒状，主要分布于细胞质，核膜亦可见阳性表达。bFGF蛋白阳性表达为细胞核内被染成棕黄色，并且胞浆、核膜可见阳性表达。0、1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca10948h后，细胞内VEGF蛋白相对表达量依次为：（85.43±0.53）×10-2、（77.45±0.51）×10-2、（51.43±0.34）×10-2、（21.74±0.11）×10-2；bFGF蛋白的相对表达量依次为：（71.41±0.52）×10-2、（51.63±0.46）×10-2、（38.44±0.32）×10-2、（11.24±0.21）×10-2。可以看出，随着药物浓度的增加，各个指标的相对表达量逐渐减少，经统计学分析，各个实验组分别与对照组比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），且实验组之间进行两两比较，差异也具有统计学意义（P<0.05）。
　　4．PCR结果：0、1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca109细胞48h后，VEGF mRNA表达量依次为：（12.40±1.11）×10-2、（7.27±0.71）×10-2、（4.63±0.45）×10-2、（1.62±0.25）×10-2；bFGF mRNA表达量依次为：（17.96±0.46）×10-2、（15.32±0.33）×10-2、（12.04±0.50）×10-2、（9.13±0.30）×10-2。可以看出，随着药物浓度的增加，各个指标的表达量逐渐减少，经统计学分析，各个实验组分别与对照组比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），且实验组之间进行两两比较，差异也具有统计学意义（P<0.05）。
　　结论:
　　1、在一定浓度范围内，ATRA对食管癌Eca109细胞的增殖具有抑制作用，并且随着剂量的增大或作用时间的延长，抑制作用越明显，因此具有剂量和时间依赖性。
　　2、在一定浓度范围内，ATRA可以抑制Eca109细胞的迁移，抑制VEGF、bFGF的mRNA和蛋白的表达，并且随着药物浓度的增加，抑制作用越明显。
　　3、ATRA可能通过下调VEGF、bFGF基因的表达影响食管癌Eca109血管新生从而抑制其生长。

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英文缩略词索引

前言

材料与方法

1 材料

1.1 细胞系

1.2 主要试剂

1.3 主要实验仪器

1.4 主要试剂配制

2 实验分组与方法

2.1 实验分组

2.2 MTT法检测不同处理组细胞增殖抑制率

2.3 划痕实验检测不同处理组细胞的迁移率

2.4 细胞免疫组织化学检测不同处理组细胞VEGF和bFGF 蛋白的表达

2.5RT-PCR检测不同处理组细胞VEGF及bFGF mRNA表达

2.6 统计学处理

结果

1 不同浓度ATRA对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用

2 不同浓度ATRA对食管癌Eca109细胞的迁移能力的影响

3 不同浓度ATRA作用48h后对Eca109细胞VEGF及bFGF蛋白表达的影响

4 不同浓度 ATRA 作用 48h 后对 Eca109 细胞 VEGF 及 bFGF mRNA表达的影响

讨论

结论

参考文献

综述： 全反式维甲酸抗肿瘤血管生成的研究现状

个人简历及在读期间发表的学术论文