p300对胃癌细胞SGC7901和BGC823增殖的抑制效应

摘要

研究背景：
　　p300是具有组蛋白乙酰转移酶（histone acetyl-transferases,HATs）活性的转录辅因子，可以乙酰化4个核心组蛋白以及其他转录因子，调控许多基础生物学过程，包括生长、发育以及癌发生和凋亡。肿瘤细胞抑癌基因启动子组蛋白乙酰化降低，导致其表达下调。CBP/p300能促进对关键肿瘤抑制因子p53、BRCA1和FOXO3a的转录活化，从而抑制肿瘤的发生；然而，作为癌基因c-Myc、c-Myb和AR的辅活化因子，在特定条件下CBP/p300也可促进细胞增殖和癌症发生。野生型p300质粒pcDNA3.1中所含的HAT结构域是正常的，突变型p300质粒pcDNA3.1的HAT结构域缺失。
　　研究目的：
　　在胃癌细胞中，p300对胃癌细胞增殖的效应；野生型p300以及突变型p300对胃癌细胞组蛋白乙酰化的效应；并探讨p300对胃癌细胞增殖效应的机制。
　　材料与方法：
　　1.实验分组将胃癌细胞SGC7901和BGC823随机分为四组：实验组为三组，分别转染2μl浓度为400ng/μl的野生型质粒p300、突变型质粒p300、空质粒，分别作用24h、48h和72h；对照组加入同体积的无血清双抗的RPMI1640培养基。
　　2.MTT实验收集上述实验组和对照组的细胞，MTT法分别检测胃癌细胞SGC7901和BGC823在24h、48h和72h时间点的增殖情况。
　　3.免疫细胞化学收集培养24h、48h和72h的实验组和对照组细胞分别做细胞滴片，应用免疫荧光观察四组细胞的acK14-H3以及p300的免疫反应性并进行半定量分析，检测不同p300表达质粒转染的胃癌细胞组蛋白乙酰化程度。
　　4.流式细胞术应用流式细胞术检测转染了不同p300表达质粒的胃癌细胞SGC7901和BGC823的细胞周期。观察p300是否可以诱导细胞周期阻滞。
　　5.统计学处理应用SPSS20.0统计软件处理数据，P＜0.05为差异有显著性。
　　结果：
　　1.p300对胃癌细胞增殖的影响对于胃癌细胞SGC7901，转染24h后，野生型p300组跟突变型p300组胃癌细胞增殖无显著性差异（P＞0.05)；转染48h、72h后，野生型p300组胃癌细胞增殖显著低于突变型p300组（P＜0.05）。对于胃癌细胞BGC823，转染24h、48h后，野生型p300组胃癌细胞增殖显著低于突变型p300组（P＜0.05），转染72h后，野生型p300组跟突变型p300组胃癌细胞增殖无显著性差异（P＞0.05)。胃癌细胞SGC7901和BGC823,实验组胃癌细胞增殖显著低于对照组（P＜0.05），表明转染p300不同表达载体可明显抑制胃癌细胞增殖（P＜0.05）。
　　2.p300对胃癌细胞14位赖氨酸乙酰化的组蛋白 H3免疫反应性的效应acK14-H3 IR显示为绿色荧光，对于胃癌细胞SGC7901，野生型p300组及突变型p300组阳性细胞的平均acK14-H3 IR显著高于对照组（P＜0.01)，野生型组阳性细胞平均acK14-H3 IR显著高于突变型组（P＜0.01)；对于胃癌细胞BGC823，转染24h、48h后野生型组阳性细胞平均acK14-H3 IR显著高于对照组（P＜0.01)，且野生型组阳性细胞平均acK14-H3IR显著高于突变组（P＜0.01)，72h野生型组阳性细胞平均acK14-H3 IR跟对照组无显著性差异（P＞0.05)。表明p300可显著提高胃癌细胞SGC7901和BGC823的acK14-H3 IR。
　　3.胃癌细胞p300的免疫反应性 p300的IR显示为绿色，在胃癌细胞SGC7901和BGC823中，野生型p300组阳性细胞平均IR显著高于对照组（P＜0.01)，野生型p300组阳性细胞平均IR显著高于突变型p300组（P＜0.01)；表明p300可显著提高胃癌细胞SGC7901和BGC823的p300 IR。
　　4．流式细胞术实验结果野生型p300质粒以及突变型p300质粒转染胃癌细胞48h后，与对照组相比，处于G0/G1期的胃癌细胞数显著增加（P＜0.05)，同时处于S期细胞数显著下降（P＜0.05)，且野生型组跟突变型组无显著性差异（P＞0.05)，表明p300可以诱导胃癌细胞周期阻滞。
　　结论：
　　野生型p300以及缺失HAT结构域的突变型p300均可以抑制胃癌细胞的增殖，野生型p300的抑制作用更强，并且诱导胃癌细胞周期阻滞。p300可能通过乙酰化抑癌基因组蛋白，从而抑制胃癌细胞增殖。