基于单抗特异性的2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米粒的初步研究

摘要

肿瘤的靶向治疗是目前研究的热门领域之一，本课题旨在建立一种高度精准的靶向给药系统 HER2-2-ME-BSANPs，即以牛血清白蛋白（BSA）为载体，抗 HER2单克隆抗体为靶头，将“弹头”药物2-甲氧基雌二醇递送至特定肿瘤部位，增加药物在肿瘤部位的蓄积及摄取，缓慢释放药物，有效提高其抗肿瘤效果，减小药物的毒副作用。本课题主要研究内容可分为三个部分：
　　第一部分，HER2-2-ME-BSANPs的制备及相关制剂学表征。
　　采用去溶剂化法制备2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米粒（2-ME-BSANPs），再利用异型双功能交联剂SPDP将抗HER2单抗与2-ME-BSANPs进行偶联反应，制备抗人乳腺癌特异性纳米粒HER2-2-ME-BSANPs。通过SDS-PAGE电泳、凝集试验和免疫荧光实验，证实抗HER2单抗与2-ME-BSANPs偶联成功，该给药系统具有高度免疫活性及特异性；DTT法检测抗 HER2单抗与2-ME-BSANPs偶联比为36.28％，可实现高效靶向作用；HER2-2-ME-BSANPs平均粒径和电位分别为（221.5±2.1） nm和（-25.59±0.69） mV，纳米粒大小均匀、稳定；HPLC检测 HER2-2-ME-BSANPs的包封率与载药量分别为（89.15±3.80）%和（8.31±2.50）%，增加了2-ME的溶解性、提高了其生物利用度；制剂HER2-2-ME-BSANPs的体外释药结果表明，相比于2-ME原料药，HER2-2-ME-BSANPs具有缓释性，延长了2-ME的半衰期。
　　第二部分，HER2-2-ME-BSANPs的体外细胞毒性及靶向性研究。
　　以人乳腺癌细胞SK-BR-3（HER2受体阳性表达，HER2+）和MCF-7（HER2受体阴性表达，HER2-）为模型细胞，考察HER2-2-ME-BSANPs的体外抗肿瘤活性及靶向性。MTT结果显示HER2-2-ME-BSANPs对SK-BR-3细胞的抑制作用高于MCF-7细胞，且对该两种肿瘤细胞的抑制均呈现浓度与时间依赖性，与游离药物相比，抗肿瘤药效具有显著性差异；细胞摄取结果表明HER2-2-ME-BSANPs在抗HER2单抗的介导作用下，可快速、高效进入HER2受体阳性表达的肿瘤细胞内部；细胞周期结果显示HER2-2-ME-BSANPs将两种肿瘤细胞均阻滞于G2/M期，具有细胞周期阻滞作用，且未改变2-ME的阻滞周期；细胞凋亡及自噬结果证明HER2-2-ME-BSANPs可通过诱导细胞凋亡及细胞自噬对 SK-BR-3细胞和MCF-7细胞的增殖产生抑制作用。靶向给药系统HER2-2-ME-BSANPs可将药物精准、高效地导向于特定肿瘤细胞，在体外具有良好的抗肿瘤活性及靶向性。
　　第三部分，HER2-2-ME-BSANPs的药代动力学、药效学及体内靶向性研究。
　　以SD大鼠为动物模型，研究靶向制剂HER2-2-ME-BSANPs体内药动学特征。结果显示，相比于2-ME原料药，HER2-2-ME-BSANPs在体内的消除半衰期及平均滞留时间显著延长，药物的血浆清除速率减小，AUC明显增加，表明靶向制剂HER2-2-ME-BSANPs具有缓释性，使药物在肿瘤部位缓慢释放，延长有效药物浓度时间，持久发挥肿瘤治疗作用，同时可改善药物2-ME生物利用度低及半衰期短等缺点。
　　选用BALB/c裸鼠为模型动物，人乳腺癌细胞SK-BR-3（HER2+）和MCF-7（HER2-）细胞为模型细胞，构建荷瘤鼠模型。采用经典药理学方法考察HER2-2-ME-BSANPs的体内抗肿瘤活性，结果显示 HER2-2-ME-BSANPs对HER2受体阳性表达的乳腺癌抑制效果明显优于HER2受体阴性表达的乳腺癌，表明相比2-ME和2-ME-BSANPs，HER2-2-ME-BSANPs在体内具有高效的抗肿瘤活性。同时，采用活体成像技术和荧光染料 DIR标记该给药系统，观察其在小鼠体内各组织的分布特征，并解剖出各脏器，拍照，观察药物载体的肿瘤靶向特征，结果显示该靶向给药系统在 HER2受体阳性表达的乳腺癌的荧光信号强于 HER2受体阴性表达的乳腺癌，且其在肝脏中较少蓄积，表明该靶向给药系统可浓集于特定肿瘤部位，增加药物在肿瘤组织的摄取，发挥良好的抗肿瘤效果。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一章 绪论

1. 引言

2. 白蛋白的研究进展及应用

3. 抗体偶联物

4. 模型药物的选择

5. 本课题的设计思路及研究意义

第二章 抗HER2单抗偶联2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米粒的制备及表征

1. 实验材料

2． 实验方法

3. 制剂HER2-2-ME-BSANPs的表征

4. 实验结果与讨论

5. 本章小结

第三章 HER2-2-ME-BSANPs靶向给药系统的体外细胞毒性及靶向性研究

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 实验结果与讨论

4. 本章小结

第四章 HER2-2-ME-BSANPs靶向给药系统的药物代谢动力学研究

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 实验结果与讨论

4. 本章小结

第五章 HER2-2-ME-BSANPs靶向给药系统的体内抗肿瘤活性及靶向性研究

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 实验结果与讨论

4. 本章小结

全文总结

参考文献

个人简历

致谢