短发夹状RNA抑制livin基因在乳腺癌细胞系MCF7中的表达

摘要

目的：研究凋亡抑制因子Livin特异的短发夹状RNA(shRNA)在MCF7乳腺癌细胞中对外源livin基因表达的抑制作用。 方法：利用基因重组技术构建四组EGFP-Livin融合表达的重组质粒：Pgenesil-8-livin-shRNA1，Pgenesil-8-livin-shRNA2，Pgenesil-8-livin-HK，Pgenesil-8-livin(Pgenesil-8为含有绿色荧光蛋白EGFP的空质粒产品，shRNAl，shRNA2为目的基因livin α的两个干扰片断，HK为通用阴性对照序列，livin表示GenBank中livin α的cDNA序列中的CDS区，GI：15680240，)电转染入MCF7乳腺癌细胞中，24h后荧光显微镜观察转染情况，48h后用荧光显微镜观察各实验组细胞中EGFP的表达，流式细胞仪检测细胞转染后平均荧光强度，即标志livin α在蛋白水平上的表达。应用半定量逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各实验组细胞中livin α在RNA水平的表达。 结果：转染24h后，荧光显微镜观察结果显示载体成功转染入MCF7乳腺癌细胞，四组细胞的转染效率40％-70％不等。转染入Pgenesil-8-livin-shRNA1， Pgenesil-8-livin-shRNA2的两组MCF7乳腺癌细胞中绿色荧光亮度都弱于转染了 Pgenesil-8-livin-HK ，Pgenesil-8-livin 的两组细胞中 EGFP 的亮度， Pgenesil-8-livin-shRNA2转染后的细胞中目的基因mRNA的表达量与Pgenesil-8-livin转染后的细胞中mRNA的表达量相比差异显著(P<0.01)，有统计学意义。而Pgenesil-8-livin-shRNA1转染后的细胞中目的基因mRNA的表达量与Pgenesil-8-livin转染后的细胞相比无显著差异(P>0.05)，无统计学意义。 结论：目的基因的干扰序列shRNA2对目的基因livin α在MCF7乳腺癌细胞中有干扰效果，抑制了livin α基因的表达。而shRNA1对目的基因livin α无干扰作用，且不能抑制目的基因的表达，为无效序列；shRNA2干扰序列可以干扰MCF7乳腺癌细胞外源livin α的表达，为下一步细胞内源基因的干扰以及动物体内实验打下了基础。

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