PFTK1、LRP5、LRP6与VEGF-C在食管鳞癌组织中的表达及意义

摘要

背景与目的：
　　目前在全球范围内，消化道恶性肿瘤频繁发生且愈发严重，其中食管癌是一种较为严重的恶性肿瘤，具有很高的发病率与死亡率，在较大程度上危害人民生命健康。作为世界上食管癌高发地区，我国食管癌患病率居高不下且不断增长，大约10万人中便有10人发病，特别是在河北（太行山周边），以及河南的林州市、辉县、安阳等地区。食管癌的组织学类型主要以鳞状细胞癌和腺癌两种为主，在我国大部分食管癌患者中，鳞状细胞癌为主要的发病类型，而腺癌仅占一小部分。食管癌解剖部位较为特殊，因此食管癌的早期诊断极为困难，患者常常在症状发作甚至严重时才进行诊治，发病率约等同于死亡率。因此若能在早期病变时明确诊断并加以治疗，对筛选高危病人及提高患者生存率大有益处。
　　食管癌有很多方面的发病原因，目前主要有遗传因素、环境因素等学说，但仍未阐释清晰。随着细胞与分子生物学的逐渐快速发展，人们逐步认识到肿瘤的发生与发展是一个多因素、多基因参与的复杂过程。关于食管癌临床形态学和病理特征的研究日益增多，但仍未筛选出具有临床实用价值的预测因子。
　　近年来许多研究显示，除了受癌基因与抑癌基因调控细胞恶性转化外，细胞周期调控分子及其受体蛋白，即细胞周期蛋白依赖性激酶等，可激活体内细胞信号转导通路，并激发执行细胞周期有序进行中的重要功能，在细胞生长与增殖、分化中具有重要作用与意义。CDK14（PFTK1）是一个比较新且研究甚少的 CDK家族成员，它是细胞周期蛋白依赖性激酶（ cyclin dependent kinase,CDK）的一种，研究者发现 PFTK1/CyclinY可以在体内磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白（low-density lipoprotein receptor-related protein，LRP）5和6，而LRP5和LRP6均可与Wnt蛋白结合，结合后其作为胞外信号的辅助性受体，具有重要调节作用。目前已有报道CDK14可作为少有调控因子调控肝癌的发生发展。但其在食管鳞癌中的表达仍未见报道。
　　Pang等发现了PFTK1的过表达与肿瘤晚期转移与微血管的侵袭均密切相关,血管内皮生长因子家族的血管内皮生长因子-C（ vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）作为最重要的调控淋巴管生成信号传导通路的生长因子，它可诱导血管和淋巴管的生成，促进肿瘤细胞的淋巴结转移，但其在食管鳞癌淋巴结转移及预后中的作用尚不能确定，与PFTK1的关系研究尚未有报道。本实验采用原位杂交和免疫组织化学SP法分别检测PFTK1、LRP5、LRP6与VEGF-C蛋白和mRNA在食管鳞癌中的表达水平，阐明以上四种因子对于食管鳞癌发生、发展、浸润及转移的影响及其相互关系。
　　材料与方法：
　　1.分别选取53例食管鳞癌组织、21例癌旁不典型增生组织、25例正常食管黏膜组织，采用免疫组化SP法测定3种组织中PFTK1、LRP5、LRP6和VEGF-C蛋白的表达。
　　2.运用原位杂交技术检测53例食管鳞癌组织、21例癌旁不典型增生组织、25例正常食管粘膜组织中的PFTK1、LRP5、LRP6与VEGF-CmRNA表达。
　　3.采用SPSS20.0进行统计分析。其阳性率比较采用χ2检验进行；对于数据不符合卡方检验分析条件时，运用Fisher确切概率法。
　　结果：
　　1.食管鳞癌组织中PFTK1mRNA及蛋白表达水平随着LRP5、LRP6、VEGF-C表达水平的升高而升高（P<0.05）。
　　2.与正常食管黏膜组织和癌旁不典型增生组织相比，PFTK1mRNA和蛋白表达的阳性率在食管鳞癌组织中显著增高，其mRNA阳性率分别为4.0％（1/25）、38.1%（8/21）、83%（44/53），三者比较差异具有统计学意义（P<0.05），其蛋白表达的阳性率分别为8.0%（2/25）、38.1%（8/21）、71.7%（38/53），三者比较差异具有统计学意义（P<0.05）；PFTK1mRNA及蛋白表达的阳性率与性别和年龄大小无关（P>0.05）；PFTK1mRNA及蛋白表达的阳性率与肿瘤的浸润深度、组织学分级、是否出现淋巴结转移有关且呈正相关（P<0.05）。
　　3.与正常食管黏膜组织和癌旁不典型增生组织相比，食管鳞癌组织中LRP5mRNA及蛋白表达的阳性率明显增高，其mRNA阳性率分别为8.0%（2/25）、23.8%（5/21）、75.4%（40/53），三者比较差异具有统计学意义（P<0.05），其蛋白表达的阳性率分别为12%（3/25）、38%（8/21）、74.8%（39/53），三者比较差异有统计学意义（P<0.05）；LRP5mRNA及蛋白表达的阳性率与患者的性别和年龄大小无关（P>0.05），而与肿瘤的浸润深度、组织学分级、以及是否出现淋巴结转移有关且呈正相关（P<0.05）。
　　4.与正常食管黏膜组织和癌旁不典型增生组织相比，食管鳞癌组织中LRP6mRNA及蛋白表达的阳性率显著增高，其mRNA阳性率分别为0%（0/25）、47.6%（10/21）、79.2%（42/53），三者比较差异具有统计学意义（P<0.05），其蛋白阳性率分别为19%（4/25）、42.8%（9/21）、69.8%（37/53），三者比较差异有统计学意义（P<0.05）；LRP6 mRNA及蛋白表达的阳性率与患者的性别和年龄大小无关（P>0.05），而与肿瘤的浸润深度、组织学分级、以及是否出现淋巴结转移有关且呈正相关（P<0.05）。
　　5.与正常食管黏膜组织和癌旁不典型增生组织相比，食管鳞癌组织中VEGF-CmRNA及蛋白表达的阳性率显著增高，其mRNA阳性率分别为4.0%（1/25）、19%（4/21）、62.3%（33/53），三者比较差异有统计学意义（P<0.05），其蛋白阳性率分别为0%（0/25）、23.8%（5/21）、69.8%（37/53），三者比较差异有统计学意义（P<0.05）；VEGF-CmRNA及蛋白表达的阳性率与患者的性别和年龄大小无关（P>0.05），而与肿瘤的浸润深度、组织学分级、以及是否出现淋巴结转移有关且呈正相关（P<0.05）。
　　结论：
　　1.食管鳞癌组织中PFTK1、LRP5、LRP6、VEGF-CmRNA及蛋白表达明显升高，提示PFTK1、LRP5、LRP6与VEGF-C四种因子可能参与食管鳞癌的发生。
　　2.食管鳞癌组织中PFTK1与LRP5、LRP6、VEGF-C表达呈正相关，说明PFTK1的异常表达可能通过调控Wnt信号通路中的LRP5、LRP6的表达以及VEGF-C的表达参与食管鳞癌的发生发展。

目录

声明

英文缩写词及中英文对照索引

前言

材料与方法

1实验材料

2实验方法

3、统计学处理

结果

1 原位杂交技术检测PFTK1、LRP5、LRP6、VEGF-C mRNA表达

2、 免疫组织化学检测PFTK1、LRP5、LRP6、VEGF-C蛋白表达

3、 PFTK1与LRP5、LRP6、VEGF-C mRNA在食管鳞癌组织中表达的相关性分析

4、PFTK1与LRP5、LRP6 、VEGF-C蛋白在食管鳞癌组织中表达的相关性分析

讨论

1、Wnt信号通路与肿瘤

2、PFTK1及VEGF-C

3、LRP5及LRP6

4、本研究结果分析

结论

参考文献

综述:肿瘤相关基因PFTK1研究进展

个人简历及在硕士期间曾经发表论文

致谢