热休克蛋白70与自发性早产及其合并组织学绒毛膜羊膜炎的关系

摘要

背景与目的：
　　早产在全球的发生率为5％~18%，按原因分为自发性早产、未足月胎膜早破早产和医源性早产。其中，60%的早产属于自发性早产，是导致围产儿病死率居高不下的主要原因。尽管目前已进行大量关于早产防治的基础和临床研究，但早产率仍较高。近年有研究表明组织学绒毛膜羊膜炎（histologic chorioamnionitis, HCA）与自发性早产的发生密切相关。HCA不等同于宫内感染，其由微生物入侵或“危险信号”释放引起，发病隐匿，无明显临床表现，可导致新生儿不良结局，且与孕周明显相关，即孕周越小，HCA发生概率越大。目前已发现的危险信号分子包括HSP70（heat shock protein, HSP70），其是一类在生物界广泛表达的高保守蛋白质，当受到缺血、缺氧、高温、感染等刺激时表达增加。以往认为HSP70是细胞内蛋白质，作为“分子伴侣”参与蛋白质的折叠、解聚、易位等；近年研究发现，HSP70可释放到细胞外，参与激活先天性和适应性免疫反应。
　　因此，本研究通过检测孕妇胎膜组织中 HSP70的表达和外周血、脐血中HSP70的水平，探讨HSP70与自发性早产及其合并HCA的关系。
　　材料与方法：
　　1.研究对象
　　选择2015年6月~2017年1月在郑州大学第三附属医院产科住院并分娩的自发性早产孕妇63例，根据产后胎膜组织病理学检查进一步分为合并 HCA孕妇26例（早产合并HCA组），未合并HCA孕妇37例（早产未合并HCA组）；选择同期正常足月分娩的孕妇32例（足月正常组）。
　　2.实验方法
　　（1）采用免疫组化SP法检测胎膜组织中HSP70蛋白的定位及阳性表达率；（2）采用实时荧光定量PCR法检测胎膜组织中HSP70 mRNA的表达；（3）采用蛋白印迹法检测胎膜组织中HSP70蛋白的表达；（4）采用ELISA法检测外周血、脐血中HSP70的水平；（5）比较母儿围产结局。
　　3.统计学处理
　　采用SPSS21.0软件行统计学分析，正态分布的计量资料采用-x±s表示，多组定量资料采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验。计数资料采用百分率表示，组间比较采用χ2检验。相关性分析用Pearson检验。检验水准α=0.05。组间两两比较时采用校正检验水准α＇=α/比较次数=0.0167。
　　结果：
　　1.孕妇一般情况比较
　　三组孕妇分娩孕周比较，早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别小于足月正常组，差异均有统计学意义（P<0.01）。三组孕妇年龄、初产妇比例、入院分娩前体重指数比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
　　2.胎膜组织中HSP70蛋白的定位及阳性表达率
　　免疫组化SP法检测显示，HSP70表达于绒毛膜和羊膜上皮细胞的细胞质和细胞膜。早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组胎膜组织中HSP70蛋白的阳性表达率分别为92%（24/26）、65%（24/37）、34%（11/32）。三组比较，早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组，差异均有统计学意义（P<0.01）；早产合并HCA组高于早产未合并HCA组，差异具有统计学意义（P<0.01）。
　　3.胎膜组织中HSP70 mRNA的表达
　　实时荧光定量PCR法检测显示，早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组的胎膜组织中HSP70 mRNA的相对表达量分别为（1.203±0.350）、（0.947±0.140）、（0.657±0.175）。三组比较，早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组，差异均有统计学意义（P<0.01）；早产合并HCA组高于早产未合并HCA组，差异具有统计学意义（P<0.01）。
　　4.胎膜组织中HSP70蛋白的表达
　　蛋白印迹法检测显示，早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组的胎膜组织中 HSP70蛋白的相对表达量分别为（1.001±0.055）、（0.879±0.041）、（0.521±0.032）。三组比较，早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组，差异均有统计学意义（P<0.01）；早产合并HCA组高于早产未合并HCA组，差异具有统计学意义（P<0.01）。
　　5.外周血和脐血中HSP70的水平
　　ELISA法检测显示：早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组孕妇外周血中HSP70的水平分别为（1.601±0.168）ng/mL、(1.245±0.092)ng/mL、(0.786±0.093)ng/mL；新生儿脐血中HSP70的水平分别为（0.935±0.082）ng/mL、(0.756±0.056)ng/mL、(0.577±0.075)ng/mL。三组孕妇外周血、新生儿脐血中HSP70的水平比较，早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组，差异均有统计学意义（P<0.01）；早产合并 HCA组高于早产未合并 HCA组，差异具有统计学意义（P<0.01）。
　　6.早产合并HCA组血清和胎膜组织中HSP70的相关性分析
　　早产合并 HCA组孕妇外周血与新生儿脐血中 HSP70的水平呈正相关（r=0.782, P<0.05）；早产合并HCA组孕妇外周血中HSP70水平与胎膜组织中HSP70蛋白的相对表达量呈正相关（r=0.819, P<0.05）。
　　7.母儿结局的比较
　　三组孕妇均无产后出血、产褥感染发生。早产合并HCA组中5例（19%）发生新生儿败血症，而早产未合并HCA组和足月正常组无新生儿败血症，三组比较，差异具有统计学意义(F=14.006, P<0.05）。
　　结论：
　　HSP70与早产合并HCA的发生发展有关，可能发挥其先天性促炎免疫反应；同时HSP70可能通过多种机制参与早产的发生。

目录

声明

中英文缩略词对照

1 引言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验试剂与仪器

2.3 实验方法

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 胎膜组织切片HE染色结果分析

3.2 孕妇一般情况比较

3.3 胎膜组织中HSP70蛋白的定位及阳性表达率

3.4 胎膜组织中HSP70 mRNA的表达

3.5 胎膜组织中HSP70蛋白的表达

3.6 外周血和脐血中HSP70的水平

3.7 早产合并HCA组血清和胎膜组织中HSP70的相关性分析

3.8 母儿结局的比较

4 讨论

4.1 HSP70与自发性早产合并HCA的关系

4.2 HSP70与自发性早产的关系

4.3 自发性早产与母儿结局的关系

5 结论

参考文献

综述:自发性早产的研究进展

个人简历

致谢