查尔酮衍生物cc-85调节活性氧诱导食管癌细胞凋亡的作用机制研究

摘要

目的
　　主要研究新型查尔酮类衍生物cc-85对食管癌细胞系的体外作用机制。以Nrf2为靶点，通过死亡受体途径和线粒体途径，研究cc-85的抗肿瘤作用机理，为肿瘤药物的开发提供理论依据。
　　方法
　　通过一系列药理学及分子生物学实验方法研究课题内容，主要包括MTT法检测细胞活力、流式细胞术检测活性氧水平和线粒体膜电位、蛋白免疫印迹法检测蛋白表达水平、DAPI法检测细胞核形态和免疫荧光法检测蛋白定位等。
　　结果
　　Cc-85抑制食管癌细胞株EC109，KYSE750和EC-1的细胞生存率，结果表明cc-85对正常的食管上皮细胞毒性相对较小，而对EC109和KYSE750较为敏感，抑制率显著；cc-85能够诱导EC109和KYSE750细胞的凋亡；DAPI染色表明EC109细胞核形态变小、染色加深并且出现凋亡小体；cc-85明显上调EC109细胞核KYSE750细胞内外源性受体DR4和DR5的表达；cc-85可以诱导线粒体膜电位下降，细胞内抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白表达水平的变化；caspase-3,8,9可以被cc-85诱导活化，caspase的全酶抑制剂z-VAD-fmk可以部分阻断化合物cc-85诱导 EC109的凋亡；ROS抑制剂 NAC可以逆转 cc-85诱导的 EC109和KYSE750细胞的凋亡；NAC可以逆转cc-85诱导的EC109细胞的线粒体膜电位水平；NAC可以逆转cc-85诱导的EC109细胞的抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的表达水平；NAC可以逆转cc-85诱导的EC109细胞的caspase家族的蛋白表达；cc-85可以诱导Nrf2定位于细胞核。
　　结论
　　以上结果说明查尔酮衍生物cc-85可以诱导食管癌细胞的凋亡。Cc-85可以通过Nrf2的入核转录、死亡受体DR4和DR5的增高、线粒体膜电位的下降、抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的调节等一系列信号诱导凋亡，可以作为抗肿瘤药物开发的重要理论依据。

目录

声明

英文缩略词表

1 绪言

1.1 食管癌的治疗与研究进展

1.2 查尔酮类的活性研究进展

1.3 查尔酮类合成方法的进展研究

1.4 提出课题

2 Cc-85能够显著抑制人类食管癌细胞系生长和诱导细胞凋亡

2.1 实验仪器

2.2 实验试剂

2.3 化合物和细胞株

2.4 试剂配制方法

2.5 实验方法

2.6 结果

3 Cc-85对外源性死亡受体途径的影响

3.1 实验仪器

3.2 实验试剂

3.3 化合物和细胞株

3.4 实验方法

3.5 结果

4 Cc-85部分依赖于caspase蛋白家族导致细胞凋亡

4.1 实验仪器

4.2 实验试剂

4.3 化合物和细胞株

4.4 实验方法

4.5 结果

5 Cc-85通过线粒体途径诱导EC109凋亡

5.1 实验仪器

5.2 实验试剂

5.3 化合物和细胞株

5.4 实验方法

5.5 结果

6 Cc-85引起EC109内ROS水平升高以诱导凋亡

6.1 实验仪器

6.2 实验试剂

6.3 化合物和细胞株

6.4 实验方法

6.5 结果

7 讨论

全文总结

参考文献

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢