壳聚糖修饰的羟基磷灰石纳米粒载体介导BMP-2转染成骨细胞及对其增殖、分化的影响

摘要

目的：
　　通过用壳聚糖（chitosan,CS）修饰的羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA)纳米粒载体携带骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein2,BMP2）基因转染成骨细胞,研究CS-HA对成骨细胞的毒性反应、转染后成骨细胞内BMP-2基因表达情况及对细胞增殖与分化的影响，为基因修饰的成骨细胞的临床研究奠定基础。
　　方法：
　　复苏成骨细胞株并进行传代培养；用壳聚糖对羟基磷灰石纳米粒进行表面修饰；采用MTT法检测HA-CS纳米粒载体对成骨细胞的毒性反应；用HA-CS纳米粒载体转染技术,将BMP-2目的基因导入成骨细胞,评估转染效率并采用RT-PCR法鉴定BMP-2的表达;同时检测细胞增殖情况及碱性磷酸酶（alkaline phoaphatase，ALP）活性。
　　结果：
　　MTT结果提示HA-CS纳米粒混悬液浓度在500μg/ml以下对成骨细胞生长的影响与对照组比较差异无统计学意义；其转染效率虽不及同等条件下的脂质体但优于没经修饰的HA;RT-PCR结果显示转染后同对照组及空质粒组比较成骨细胞内BMP-2稳定表达并表达增强;同时也促进了成骨细胞的增殖及增加了ALP的活性。
　　结论：
　　HA-CS纳米粒在一定浓度下对成骨细胞无毒性作用,作为输送载体可以安全地将目的基因BMP-2导入成骨细胞并稳定表达，同时促进了成骨细胞的增殖与分化。

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