TLR4和MyD88在尖锐湿疣组织中的表达及意义

摘要

目的：
　　尖锐湿疣(condyloma acuminatum，CA)是由人类乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染引起的菜花状、鸡冠状、乳头状甚至团块状赘生物，好发于生殖器和肛周，又称生殖器疣，目前已成为最常见的性传播疾病之一。临床上HPV感染数量急剧增多，但目前仍未找到根除HPV感染的方法，致使CA的感染率和复发率持续上升，已成为国家性病控制中心重点监测疾病。CA具有增生快、传染性强、易复发等特点，研究发现CA的发生、发展可能与HPV感染、细胞的增殖与凋亡及其免疫功能有关。
　　Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)作为一种病原体识别受体，在天然免疫中占重要地位，被认为是维系天然免疫和获得性免疫之间的重要纽带。TLR4作为TLRs家族成员之一，具有调节免疫反应和炎症反应的重要作用，既可诱导产生促炎素，又具有调节炎症反应的功能。TLR4介导的信号通路包括MyD88依赖性和非依赖性两条途径，MyD88依赖性通路是通过选择性地识别病原相关分子模式(PAMP)，使巨噬细胞和树突状细胞中处于被激活的状态，导致包括NF-κB在内大量的转录因子活化，细胞因子的分泌将参与获得性免疫反应的细胞的募集和激活。TLR4启动的信号通路能够调控获得性免疫应答，在此信号通路中的重要转导蛋白是MyD88（myeloid differentiation factor，88）分子通过直接和IL-1R相关激酶IRAK1、IRAK4的结合，成为IRAK4诱导IRAK1磷酸化的关键环节，并通过NF-κB激活参与多种炎症反应。目前TLR4和MyD88在尖锐湿疣组织中的表达和意义等方面的相关研究较少，本次研究将通过检测CA患者病变组织中TLR4和MyD88的表达情况，探讨TLR4、MyD88在CA发病中的意义。
　　材料与方法：
　　1、材料
　　实验组的48例CA首次发病患者，就诊于2016年10月至2017年10月我院的皮肤与性病科门诊，年龄18～60岁，平均30.18±5.3岁，其中男性30例，女性18例;病程18～140天，平均52.5±5.4天。实验组入选患者均有典型的临床表现并全部符合实验室诊断。在排除细菌、真菌感染及其他系统性疾病后，所有患者在未取材前均无涂抹或者服用免疫性药物及冷冻、激光等相关治疗。对照组20例标本全部来自我院的泌尿外科的正常成年男性行包皮环切术所切除的正常包皮组织，并且经过活体组织病理检查证实对照组全部标本均为正常组织上皮。
　　2、方法
　　严格遵循固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等实验步骤后将所有样本组织制成蜡块，并将切片后的标本免疫组化SP法检测CA组及正常组的组织中TLR4、MyD88表达情况。免疫组化结果判定:细胞浆中发现染色弥漫性的浅黄色、黄色或棕黄色颗粒为免疫组化SP染色阳性，依照阳性细胞的着色强度和百分比对指标进行分级评分:细胞中没有明显着色为0分;浅黄色1分;黄色2分;棕褐色3分。当阳性细胞占总细胞0％～10％为0分，11％～25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，76％～100％为4分。上述两项分值的乘积则为最终分数。最终分数0分为阴性(-)，1～4分弱阳性(+)，5～8为阳性(++);9～12分强阳性(+++)。每张切片随机选用5个不同区域，均在光镜下的高倍视野(×400)，最终每张切片均取平均分表示被测指标在此标本中的表达程度。
　　3、统计学处理
　　应用SPSS17.0统计软件，对所有实验中的数据进行统计描述、分析，TLR4和MyD88的阳性表达率差异使用X2检验，TLR4和MyD88的阳性表达强度的差异则应用秩和检验，在CA患者皮损组织中TLR4与MyD88之间相关性用Spearman方法分析。当P＜0.05时，表示差异有统计学意义。
　　结果：
　　1、TLR4在CA组和正常组中的表达
　　TLR4在CA组织中表达在表皮全层，胞浆充满黄色或棕黄色颗粒。48例CA组中阳性表达的强度多呈++～+++，阳性表达率为91.66％(44/48)。正常组中TLR4未见明显表达，细胞中未见明显黄染。28例正常组阳性表达的强度多呈-～+，阳性表达率为15.00％(3/20)。两组TLR4的阳性表达率差异有统计学意义（x2=35.367，P＜0.05），TLR4在两组中的阳性表达强度有明显的统计学差异(H=17.167，P＜0.05)。
　　2、MyD88在CA组织和正常包皮组织中的表达
　　MyD88在CA组织中表达在表皮全层，胞浆充满黄色或棕黄色颗粒。48例CA组中阳性表达的强度多呈++～+++，阳性表达率为95.83％(46/48)。正常组中MyD88未见明显表达，细胞中未见明显黄染。28例正常组阳性表达的强度多呈-～+，阳性表达率为10.00％(2/20)。两组中MyD88的阳性表达率差异有统计学意义(x2=46.049，P＜0.05)，MyD88在两组中的阳性表达强度有明显的统计学差异（H=17.461，P＜0.05）。
　　3、TLR4和MyD88在CA组织中表达的相关性分析
　　44例TLR4表达阳性中，MyD88阳性41例，阴性3例;46例MyD88蛋白表达阳性中，TLR4阳性44例，阴性2例。使用Spearman相关分析CA组织中TLR4与MyD88的阳性表达正相关(r=0.807，P＜0.05)。
　　结论:
　　1.TLR4在实验组中阳性表达率、阳性表达强度均远高于对照组，表明在CA中TLR4处于过表达状态，提示TLR4在CA中识别HPV，激活相关通路，发挥调节免疫反应和炎症反应的重要作用。
　　2.MyD88在实验组中阳性表达率、阳性表达强度均远高于对照组，表明在CA中MyD88处于过表达状态，提示MyD88在CA中被激活，发挥转导作用，从而参与机体的免疫调节。
　　3.在CA组织中TLR4和MyD88之间呈正相关表达状态，TLR4、MyD88共同参与在CA中的发生、发展。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照表

前言

材料与方法

1 临床资料

2 实验主要试剂、仪器

3 实验步骤

4 统计学处理

结果

1 TLR4在CA实验组和正常组中的表达

2 MyD88在CA组织和正常组织中的表达

3 TLR4和MyD88在CA组织中表达的相关性分析

讨论

结论

参考文献

附图

综述 Toll样受体与MyD88研究进展

个人简历、在读期间发表的论文

致谢