牡丹组织培养与快速繁殖

摘要

本研究以不同品种牡丹的鳞芽为外植体，探讨了不同生长调节物质和不同环境因子在鳞芽的萌发、增殖以及生根过程中的作用，分析不同培养过程中主要影响因子有效浓度的范围，并进一步对生根试管苗从显微结构上进行了观察研究；同时又以中原牡丹品种“凤丹”幼胚为外植体，初步探讨了在牡丹愈伤组织的诱导、增殖分化过程中主要的影响因子及有效范围浓度，以此建立起牡丹幼胚培养及植株再生体系，为提高其繁殖系数、加快规模化育苗速度、进一步利用生物技术对其品种进行改良等研究奠定基础。结果如下： 1．以“朱砂垒”磷芽和“海黄”茎段为材料，对牡丹外植体消毒方法进行了研究。结果表明，70％酒精对牡丹外植体损伤较大，在对牡丹外植体进行消毒处理时，只需要用0.1％HgCl<,2>，根据取材时间及材料幼嫩程度的不同，牡丹鳞芽消毒时长以8～10min为宜，叶柄以5～8min为佳。 2．以“朱砂垒”、“脂红”、“映金红”三个品种的鳞芽为材料，分别比较不同的生长调节物质(IAA、6-BA、GA<,3>)对三种牡丹鳞芽萌发的影响，结果表明：不同的生长调节物质对不同品种鳞芽萌发率的影响不同， 6-BA对三个不同品种鳞芽萌发的影响都比较明显，低浓度或者不加6-BA的培养基更利于提高牡丹鳞芽的萌发率，培养基MS+6mmol/L Ca<'2+>+IAA0.5nag·L<'-1>+GA<,3>1.0 mg·L<'-1>比较适合鳞芽的萌发。 3．把8个不同的品种，即“凤丹”、“朱砂垒”、“璎珞宝珠”、“乌龙捧盛”、“洛阳红”、“映金红”、“脂红”和“十八号”的鳞芽分别在相同培养条件下进行诱导培养，结果表明8个品种之间萌发率的差异依次为：“朱砂垒”>“脂红”>“璎珞宝珠”>“乌龙捧盛”>“映金红”>“凤丹”>“十八号”>“洛阳红”，其中以“朱砂垒”的萌芽率最高，为85％；“洛阳红”最差，萌芽率仅为25％。 4．利用正交设计进行朱砂垒试管苗增殖试验研究，结果表明GA<,3>和6-BA是“朱砂垒”试管苗增殖过程的重要的生长调节物质，同时，附加0.3 mg·L<'-1>的KT可以明显的提高“朱砂垒”增殖培养的增殖系数，但当附加的KT的浓度达到0.5 mg·L<'-1>以上时，又会使“朱砂垒”试管苗的增殖受到一定的抑制作用。 5．以“朱砂垒”试管苗为材料，利用正交设计，进行生根诱导试验。通过生根系数、平均根数及平均根长等生长指标研究发现：单一生长物质IBA不能诱导“朱砂垒” 试管苗根的发生，必须适当的附加IAA或者ABT才能诱导生根。蔗糖和FA对“朱砂垒”试管苗生根系数及平均根数也有显著的影响作用，并且，FA和IBA的浓度水平对试管苗的平均根长有很大的影响；从生根系数、平均根数及平均根长三个指标综合分析，培养基1/2MS+6mmol/LCa<'2+>+IBA2.0mg·L<'-1>+IAA0.5mg·L<'-1>+FA10g·L<'-1>+ABT0.5mg·L<'-1>+蔗糖30g·L<'-1>更有利于“朱砂垒”试管苗根的诱导。 6．以“凤丹”幼胚为材料，进行牡丹愈伤组织的诱导试验，比较不用生长调节物质对牡丹愈伤组织诱导的影响，同时又对牡丹愈伤组织的分化增殖进行了研究。结果表明：NAA、基本培养基类型及2，4-D是影响幼胚出愈率的重要因素，各因素不同的水平间都有很显著的差异；MS+6mmol/LCa<'2+>的基本培养基和高浓度的2，4-D更利于愈伤组织的诱导，而NAA浓度以1.5 mg·L<'-1>为宜，过高或者过低的NAA都会对“凤丹”幼胚的出愈率有明显的抑制作用；在愈伤组织的增殖分化过程中，KT和6-BA起重要作用，是愈伤组织增殖分化的重要因素。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略语表

声明

1文献综述

2研究目的与意义

3材料和方法

3.1材料

3.1.1试验材料

3.1.2试验仪器设备

3.1.3常用药品

3.2方法

3.2.1外植体的选择及处理

3.2.2外植体的消毒

3.2.3鳞芽萌发培养

3.2.4试管苗增殖培养

3.2.5生根培养

3.2.6试管苗根石蜡切片观察

3.2.7试管苗的驯化移栽

3.2.8幼胚愈伤组织的诱导

3.2.9愈伤组织的增殖分化

4结果与分析

4.1外植体的消毒

4.1.1不同消毒时间对"朱砂垒"鳞芽诱导培养的影响

4.1.2不同消毒时间对"海黄"茎段愈伤组织诱导的影响

4.2鳞芽萌发培养

4.2.1“朱砂垒”鳞芽萌发培养

4.2.2"脂红"鳞芽萌发培养

4.2.3"映金红"鳞芽萌发培养

4.2.4不同品种鳞芽萌发培养

4.3试管苗增殖培养

4.4生根培养

4.4.1不同生长调节物质对"朱砂垒"生根系数的影响

4.4.2不同生长调节物质对"朱砂垒"试管苗根数的影响

4.4.3不同生长调节物质对"朱砂垒"平均根长的影响

4.5试管苗根石蜡切片观察

4.6试管苗的驯化移栽

4.7愈伤组织的诱导

4.8愈伤组织的增殖分化

5讨论

5.1外植体的消毒

5.2鳞芽萌发培养

5.3试管苗增殖培养

5.4生根培养

5.5愈伤组织的诱导

5.6愈伤组织的增殖分化

参考文献

实验图版

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