胃肠道5-HT与肝再生的关系

摘要

肝脏是哺乳动物体内具有很强的再生能力的器官，在受到部分切除、四氯化碳中毒等刺激后能够再生。肝再生涉及细胞激活、去分化、增殖、再分化、组织结构功能重建等一系列过程，有许多问题鲜为人知。肝再生机理的阐明对探讨细胞周期调控、细胞分化、肝脏疾病的发生、发展和治疗都有很大的帮助。因此，肝脏的再生机理研究是生物和医学的一个热点。
　　 现有文献表明，肝再生受到肝源性和血源性多种因素的精细调控。消化道可以分泌多种胃肠激素，这些胃肠激素与肝再生的关系在文献中较为罕见。本研究探讨了肝大部切除(PH)后肝再生过程中胃肠激素5-HT与肝再生的关系。以大鼠为实验动物，用免疫组织化学技术和免疫荧光技术检测胃肠道5-HT免疫反应(5-HTIR)细胞、用图像分析系统测定胃肠5-HTIR细胞平均灰度、用ELESA方法检测血液中的5-HT、用银染技术显示肝细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)，研究了PH后肝再生过程中胃肠道5-HTIR细胞的变化规律和用5-HT4受体调节剂(激动剂和抑制剂)改变胃肠道5-HT的分泌量后肝细胞转录活性的变化规律。主要结果如下：(1)胃肠道5-HTIR细胞包括5-HTIR内分泌细胞和5-HTIR肥大细胞(MC)，前者位于上皮内，后者位于结缔组织中。(2)PH后的肝细胞增殖期(6～72h)内胃肠道5-HTIR内分泌细胞和5-HTIRMC数目较手术对照组显著增多(P＜0.01)，MC的5-HT阳性率逐渐增加；肝中未见5-HTIR内分泌细胞，5-HTIRMC也很少。(3)用5-HT4受体激活剂西沙必利给大鼠灌胃(10mg/kg，2次/日)后，胃肠中5-HTIR细胞数于PH后48～96h显著下降(P＜0.05)、细胞的灰度于PH后24～96h显著上升(P＜0.05)，血中5-HT的含量于PH后24～72h显著上升(P＜0.05)，肝/体重比和肝组织AgNORs颗粒数在PH后48～96h显著增加(P＜0.05)。(4)用5-HT4受体抑制剂GR113808腹腔注射(3mg/kg，2次/日)后，胃肠中5-HTIR细胞数于PH后24～96h较对照组无显著性差异，但细胞的灰度显著下降(P＜0.05或P＜0.01)，血中5-HT的含量显著下降(P＜0.05或P＜0.01)，肝/体重比于48～96h显著下降(P＜0.05或P＜0.01)，肝中AgNORs颗粒数于24～96h显著减少(P＜0.05或P＜0.01)。(5)上述结果中5-HTIR细胞的计数和灰度检测是在免疫组化染色的切片上进行的，免疫荧光染色时5-HTIR细胞的数量较免疫组织化学染色少。基于上述结果可以得出如下结论：(1)本文从形态学的角度证明了大鼠胃肠道MC可分泌5-HT，MC是消化道5-HT的来源之一。(2)PH后的肝细胞增殖期内胃肠道5-HTIR内分泌细胞和5-HTIRMC细胞数显著增多，这提示胃肠道内分泌细胞和MC分泌的5-HT可能与肝再生有关。(3)分别用作用相反的两种5-HT4受体调节剂处理动物，人为改变胃肠道5-HT的分泌量(增加或减少)，可导致肝/体重比和肝细胞的转录活性发生相应的改变(增加或减少)，这说明胃肠道分泌的5-HT在肝再生过程中有重要作用。(4)临床上使用5-HT4受体调节剂时要考虑患者的具体情况，比如对于PH后处于恢复期的患者不宜使用GR113808之类的5-HT4受体抑制剂药物，而像西沙必利之类的5-HT4受体激活剂的使用可能对肝脏的恢复有利。

目录

文摘

英文文摘

缩略词对照表

第一章 文献综述

1 肝脏与肝再生

1.1 肝脏的结构

1.2 肝脏的再生

2 5-HT 与5-HT受体

2.1 5-HT

2.2 5-HT受体

2.3 5-HT的作用

3 5-HT 与肝再生

3.1 5-HT通过神经系统作用于肝再生

3.2 5-HT和肝脏血管

3.3 5-HT和肝脏伤口愈合

3.4 5-HT和胆管

3.5 5-HT受体在肝再生中的作用

4 西沙必利与GR113808

4.1 西沙必利(5-HT4受体激动剂)

4.2 GR113808(5-HT4受体抑制剂)

5 研究的目的与意义

第二章 胃肠道的5-HT内分泌细胞和肥大细胞与肝再生的关系

1 引言

2 材料与方法

2.1 实验试剂

2.2 取材和固定

2.3 石蜡组织切片制作

2.4 TB染色

2.5 免疫组织化学染色

2.6 计数及分析

3 结果

3.1 5-HTIR内分泌细胞

3.2 MC

3.3 5-HTIR MC

3.4 MC的5-HT阳性率

4 分析与讨论

第三章 5-HT4受体调节剂改变胃肠5-HT分泌后肝再生的变化

1 引言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验仪器

2.3 实验动物

2.4 取材和固定

2.5 石蜡组织切片制作

2.6 免疫组织化学染色

2.7 免疫荧光染色法

2.8 硝酸银染色

2.9 ELISA检测

2.10 计数统计

3 结果

3.1 肝／体重比的计算结果

3.2 胃肠切片5-HTIR细胞免疫组化染色结果

3.3 胃肠切片5-HTIR细胞灰度的分析

3.4 胃肠切片5-HTIR细胞免疫荧光染色

3.5 肝切片AgNORs

3.6 全血中5-HT含量的统计

4 分析与讨论

第四章 结论

参考文献

图版及说明

致谢

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