邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯对斑马鱼胚胎/幼鱼HPT轴的干扰影响研究

摘要

邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhexyl)-phthalate，DEHP)是最常用的一种酞酸酯类(phthalate acid esters，PAEs)，它能够作为一种塑化剂用于加强塑料制品的弹性和韧性。DEHP广泛应用于塑料制品，包括很多人类生活生产用品如输液管、血袋、食品包装材料、儿童文具、化妆品、人造皮革等。由于DEHP在这些产品中与塑料是物理结合并没有稳定键结合，极易释放进入环境中。目前在我们周围的不同环境中如空气、水流、土壤中都检测到不同浓度的DEHP污染，而在人体，野生动物，植物等生物体内也检测出含有DEHP。已有大量文献报道DEHP具有内分泌干扰毒性、生殖毒性、神经毒性和细胞毒性等，而DEHP在环境污染中对其水生生物的毒性影响也引起广泛关注，并且在鱼类中具有生物富集作用，DEHP污染对其他生物尤其人类健康状况的影响有待评估。
　　本课题选择斑马鱼模式生物来研究DEHP对斑马鱼胚胎/幼鱼的内分泌干扰作用，通过检测对斑马鱼胚胎下丘脑-垂体-甲状腺(hypothalamus-pituitary-thyroid, HPT)轴的影响来评估DEHP短期暴露对其生长发育的影响。将受精2小时后(2 hpf)的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的DEHP(0，40，100，200，400 ug/L)至168 hpf收样，测定斑马鱼胚胎至幼鱼的生长发育指标、甲状腺激素含量、HPT轴上与甲状腺发育和功能相关的关键基因的表达等。结果显示在环境相关浓度的DEHP暴露后，斑马鱼胚胎至幼鱼发育阶段的生长指标如存活率、孵化率和畸变率等没有显著变化:而在较高浓度组DEHP的处理显著改变了相关基因的变化，并通过HPT轴最终影响到了斑马鱼幼鱼体内甲状腺激素(thyroidhormones，THs)的含量。因此，DEHP对斑马鱼幼鱼具有甲状腺内分泌干扰毒性。由于环境污染下的DEHP浓度以不同范围存在，并且长期非单一存在，DEHP对水体野生生物的毒性及其在生物体内的富集最终对人类健康造成的影响更是亟待深入研究。本实验课题的结果可以为探究DEHP对生物的甲状腺内分泌干扰以及其毒性作用的分子机制提供思路。

目录

摘要

词语缩略表

第一章 引言

1．1 研究背景

1．1．1 DEHP概述

1．1．2 DEHP的理化性质

1．1．3 DEHP的环境降解和体内代谢途径

1．1．4 DEHP的用途和限量标准

1．1．5 DEHP在环境中的污染

1．1．6 DEHP在生物体内中的污染

1．1．7 DEHP的毒性研究现状

1．1．8 斑马鱼胚胎模型在毒理学研究中的应用

1．1．9 下丘脑-垂体-甲状腺轴

1．2 研究意义和实验设计

1．2．1 研究目的和意义

1．2．2 实验设计

第二章 材料和方法

2．1 试验材料

2．1．1 实验用斑马鱼

2．1．2 实验主要试剂

2．1．3 主要仪器设备

2．2 斑马鱼胚胎的暴露实验

2．2．1 斑马鱼的饲养和胚胎收集

2．2．2 预实验确定浓度

2．2．3 正式暴露实验和样品收集

2．3 斑马鱼幼鱼生长指标的统计

2．4 甲状腺激素检测

2．4．1 幼鱼全身激素的提取

2．4．2 ELISA检测斑马鱼幼鱼全身T4含量

2．4．3 ELISA检测斑马鱼幼鱼全身T3含量

2．5 HPT轴关键基因表达的检测

2．5．1 RNA的提取

2．5．2 cDNA的合成

2．5．3 实时荧光定量PCR

第三章 结果

3．1 斑马鱼幼鱼生长发育指标

3．2 甲状腺激素全身含量

3．3 HPT轴相关基因的表达

第四章 讨论

4．1 DEHP对斑马鱼生长发育指标的影响

4．2 DEHP对斑马鱼HPT轴上基因表达的影响

4．3 DEHP暴露对斑马鱼幼鱼体内甲状腺激素含量的影响

4．4 DEHP毒性研究的展望

第五章 结论

参考文献

致谢

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