大鼠肝再生期间14-3-3基因与糖代谢相关酶基因的表达

摘要

肝再生的研究由来已久，研究肝再生的机理能够为临床上肝病的治疗提供理论依据，研究肝再生常用的模型是2/3部分肝切除模型。14-3-3是一种高度保守的蛋白质，各亚型具有多种功能，但是这些亚型在大鼠肝再生中的研究还未见报道。肝再生期间糖代谢的变化是肝再生研究中的一项重要内容，这些变化可以通过糖代谢某些关键步骤中酶的变化来反映。在增殖的细胞中，14-3-3很可能会通过调节糖代谢中一些信号分子而影响这些酶的活性，进而影响肝再生中糖代谢的进程。
　　实验目的是，通过研究14-3-3和糖代谢相关酶对大鼠肝再生过程的影响为进一步探讨肝再生的机理提供理论依据。
　　针对上述目的制定实验方法。
　　(1)饲喂SD纯系大鼠，然后对大鼠实施2/3部分肝切除手术;在部分肝切除手术后的0h、2h、6h、12h、24h、36h、72h、120h和168h取出大鼠剩余肝脏，并制备待检样品。
　　(2)利用大鼠基因组2302.0芯片和聚丙烯酰氨凝胶电泳的方法检测大鼠肝再生期间14-3-3的7种亚型的基因表达情况，用Cy3/Cy5的方法分析数据，1433的7种亚型是14-3-3β/α、14-3-3γ、14-3-3ε、14-3-3η、14-3-3σ、14-3-3ζ/δ和14-3-3τ/θ。
　　(3)利用RT-PCR的方法检测大鼠肝再生期间糖代谢相关酶的基因表达情况，用2-△△ct未配对T检验法分析数据，糖代谢相关酶是丙酮酸激酶LR、丙酮酸脱氢酶A、柠檬酸合成酶、乳酸脱氢酶A、乳酸脱氢酶B和葡萄糖6磷酸脱氢酶。
　　最终得到以下实验结果。
　　(1)在大鼠部分肝切除手术后的168h内，14-3-3的7种亚型中有4种发生了表达，分别是14-3-3γ、14-3-3ε、14-3-3σ和14-3-3τ/θ。与0h相比，14-3-3ε在2h的表达明显下调(t＜t0.05(4)=2.776，p＞0.05)，在24h、30h、72h、120h和168h的表达明显上调(t=3.871，2.970，2.895，2.970和3.899＞t0.05(4)=2.776，p＜0.05)，14-3-3σ在30h的表达明显上调(t=5.750＞t0.01(4)=4.601，p＜0.01)，14-3-3τ/θ在2h、24h、30h和36h的表达明显上调(t=3.948，3.660，3.952和2.860＞t0.05(4)=2.776，p＜0.05)。与0h作对比，其余检测点基因的表达均无明显差别(t＜t0.05(4)=2.776，p＞0.05)。
　　(2)与0h相比，丙酮酸激酶LR的基因在2h的表达明显上调(P＜0.01)，在12h、24h、30h、36h和120h的表达明显下调(P＜0.01)，在6h、72h和168h的表达明显下调(P＜0.05)，丙酮酸脱氢酶A的基因在6h的表达明显下调(P＜0.05)，在12h、30h、36h、72h、120h、和168h的表达明显下调(P＜0.01)，柠檬酸合成酶的基因在6h、12h、24h、30h、36h、72h、120h、和168h的表达明显下调(P＜0.01)，乳酸脱氢酶A的基因在2h、6h、12h、24h、30h、36h、72h和120h的表达明显下调(P＜0.01)，乳酸脱氢酶B的基因在2h处的表达明显上调(P＜0.01)，葡萄糖6磷酸脱氢酶的基因在2h的表达明显下调，(P＜0.05)，在6h、12h、24h、30h、36h、72h和168h的表达明显下调(P＜0.01)，其余检测点基因的表达均无明显差别(P＞0.05)。
　　综上所述得出实验结论。
　　(1)在大鼠肝再生过程中，14-3-3τ可能参与G1/M期的调节，14-3-3ε、14-3-3σ和14-3-3τ可能参与G2/S期的调节，14-3-3ε可能参与细胞周期终止的调节。
　　(2)在大鼠肝再生过程中，糖代谢与肝再生密切相关。
　　(3)14-3-3γ、1433ε、14-3-3σ和14-3-3τ/θ可能会影响到大鼠肝再生过程中的糖代谢。

目录

摘要

缩略词对照表(Abbreviation)

第一章 文献综述

1．1 肝再生的研究概况

1．1．1 肝再生的概念

1．1．2 肝再生的模型

1．1．3 肝再生的过程

1．1．4 肝再生中的细胞种类

1．1．5 肝再生中调控细胞周期的相关信号通路

1．2 14-3-3的研究进展

1．2．1 14-3-3的生物学特性

1．2．2 14-3-3的生物学功能

1．3 糖代谢相关酶的简介

1．4 本论文研究的目的、意义与方案

1．4．1 研究目的与意义

1．4．2 研究方案

2．1 引言

2．2 实验材料与方法

2．2．1 实验材料

2．2．2 大鼠2／3肝切除模型的制备

2．2．3 用于检测14-3-3表达的样品制备及保存

2．2．4 检测14-3-3各亚型在肝再生期间mRNAs的相对含量

2．2．5 Western-Blot检测14-3-3各亚型蛋白的含量

2．3 实验结果

2．3．1 14-3-3各个亚型mRNAs的检测结果

2．3．2 14-3-3各个亚型蛋白的检测结果

2．4 讨论

第三章 大鼠肝再生期间糖代谢相关酶基因的表达情况

3．1 引言

3．2 实验材料与方法

3．2．1 实验材料

3．2．2 大鼠2／3肝切除模型的制备

3．2．3 肝组织待检样品的制备及保存

3．2．4 RT-PCR检测糖代谢相关酶基因的表达情况

3．3 糖代谢相关酶基因表达情况的检测结果

3．4 讨论

第四章 大鼠肝再生期间14-3-3对肝脏中糖代谢的影响分析

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的论文

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