DREB转基因烟草的获得及其对非生物胁迫耐受性研究

摘要

本研究将从本塞姆氏(NicotianaBenthamiana)中分离克隆出的NbDREB1基因和从油菜中分离克隆的BnDREB1-5基因，通过农杆菌介导法对烤烟K326品种和香料烟Basma、Izmir品种进行了转化，研究了农杆菌转化烟草的各种影响因素，并对经分子鉴定的转基因烟株进行了非生物逆境胁迫下的生物学特性分析，结果如下： 1.叶龄太长或太短，转化率都不高，20d叶龄的叶片，转化率最高；同一叶片，叶尖、叶中和叶基比较，叶中的转化率最高；预培养比不预培养有较高的转化率，预培养64h，转化率达93％：菌液浓度也影响转化率，OD600值0.45左右的菌液浓度，转化效果最好；暗培养3d，叶盘周围出现轻微菌斑，转化率最高。 2.转基因和野生型烟株叶片分别点涂(100mg/L)Km液10μl，9d后观察，野生型烟草叶片涂抹点叶色变黄，而转基因烟草叶片没有变化。PCR检测69株Km抗性烟株，37株为阳性。其中35S：NbDREB1(K326)5株，rd29A：NbDREB1(K326)5株，rd29A：BnDREB1-5(Izmir)14株，35S:BnDREB1-5(Izmir)10株，35S：BnDREB1-5(Basma)3株，阳性转化率为54％。 3.转35S：BnDREB1-5基因的香料烟Basma品种表现出良好的保水性能，上表皮细胞的气孔密度明显少于野生型，且上表皮气孔开度小于野生型。对离体烟草叶片进行自然干旱胁迫7h后，野生型烟草叶片的相对电导率是转基因烟草叶片的1.4倍：转基因烟草叶片中SOD活性比野生型烟草叶片高42％；且失水萎蔫后的复水速度快于野生型。对整体烟株进行干旱胁迫6h后，转rd29A：BnDREB1-5基因的香料烟Izmir品种叶片中脯氨酸含量和可溶性糖含量分别是野生型的3.55倍和2.33倍；高盐胁迫6h后，转基因烟株比野生型烟株的脯氨酸和可溶性糖含量高，但是差异不大，可能是处理时间短，达不到生理反应的敏感程度。这些实验结果表明，DREB类转录因子基因的转入增强了烟草的非生物胁迫耐受性。

目录

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致谢

摘要

1文献综述

2引言

3材料与方法

4结果与分析

5结论

参考文献