植物提取液对感染TMV烟叶生理生化特性及超微结构的影响

摘要

本实验通过盆栽、室内和大田试验，从生理生化指标、超微结构变化、体外钝化和烟叶生长等几方面，研究了不同植物提取液对烟草普通花叶病的疗效和对烟叶品质的影响。结果如下： 1．植物提取液对感染TMV烟株叶片叶绿素、保护酶活性和丙二醛（MDA）含量及的影响 感染TMV烟株叶片经植物提取液处理后，均不同程度的提高了叶片抗氧化酶活性，降低了膜脂过氧化程度。经过植物提取液处理的烟叶片中叶绿素和类黄酮含量与发病对照相比明显增加，SOD、CAT和POD活性与发病对照相比明显提高，MDA含量与发病对照相比有所降低。说明植物提取液可以通过增加叶片叶绿素含量、提高SOD、CAT和POD活性、降低MDA含量来增强植物的抗病性，与健康株相比，提取液处理后的烟株叶片生理生化指标均达到或接近健康株。各种提取液的效果为：配伍制剂>莲>白花蛇舌草。 2．植物提取液对感染烟草叶片总酚、类黄酮和核酸含量的影响 喷施植物提取液后能够提高感病烟株体内总酚和类黄酮含量，在15d时喷施配伍的制剂分别提高了16％和76％，莲提高了14％和53％，白花蛇舌草提高了9％和52％。另外，喷施植物提取液能够提高感病株的DNA含量，降低RNA含量，在第20d时，喷施配伍制剂、莲和白花蛇舌草叶片内DNA比阳性对照分别提高了15％、11％和11％，RNA降低了32％、29％和18％。 3．植物提取液对TMV体外活性的影响 植物提取液对TMV有强烈的钝化作用，且以配伍制剂最好，在3h时抑制率可达到92．13％，而白花蛇舌草只有50．77％；并且，作用时间越长，抑制效果越显著，在1h时，配伍制剂水提取的抑制率是50％，而在3h时，达到92．13％；水提取法对TMV的抑制作用略好于乙醇提取法，在3h时，白花蛇舌草水提取为60．61％，而白花蛇舌草乙醇提取为50．77％。但经透析处理后，致病性有所提高。电镜观察发现，在体外钝化过程中植物提取液能使病毒粒体断裂和凝集，配伍制剂的作用效果好于莲荷白花蛇舌草；作用时间越长，病毒粒子破坏越严重。植物提取液对TMV的增殖也有抑制作用，48h后制剂水提取液的抑制率为38．4％。 4．植物提取液对感染烟草叶片超微结构的影响 利用透射电镜研究了植物提取液处理的烟株在细胞和亚细胞水平上的变化，处理烟株的叶片细胞中病毒粒体和病毒结晶体显著减少，由病毒侵染而发生的细胞破坏程度显著减轻，薄壁细胞中叶绿体等各种细胞器基本完好，仅少数细胞有轻度病变。 5．植物提取液对感染烟草叶片病程相关蛋白（PR）的影响 电泳实验结果表明，经提取液处理的烟株叶片，产生新的病程相关蛋白量有差异。除了一些共有的蛋白相继产生和消失外，还产生一些各自特有的新蛋白，其中在处理后的第5d，制剂多出Rf值分别为：0．219、0．31、0．407、0．422和0．434的几条带，而少了Rf值分别为：0．659、0．743和0．951。在处理后的第20d，病程相关蛋白数量明显减少，接近健康株。 6．植物提取液对烟叶品质的影响 烟叶化学成分检测结果表明，配伍制剂处理能协调烟叶的化学成分，改善烟叶品质。钾、总糖和还原糖含量分别提高了29．71％、9．39％和4．86％，而烟碱、总氮和氯分别降低了18．23％、9．04％和37．02％，其中钾/氯、总糖/烟碱、总氮/烟碱的比值分别为5．12、13．36和1．05，均处于比较适宜的范围。 7．植物提取液对烟苗生长的影响 在苗床喷施配伍制剂能使烟苗鲜重，干重增加，尤其是根的鲜重和干重明显增加，并且发叶速度快，在育苗后70天调查，处理的叶数、根的鲜重和干重分别是7．25片/株、0．143克/株和0．008克/株，而对照为6．5片/株、0．113克/株和0．005克／株。

目录

文摘

英文文摘

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致谢

1 文献综述

1.1 植物提取物抗烟草花叶病的效果

1.2 对烟草花叶病毒有防效的植物

1.3 植物提取物中具有抗烟草花叶病的有效成分

1.3.1 蛋白质类

1.3.2 黄酮类物质

1.3.3 生物碱类

1.3.4 抗生素类

1.3.5 脂类物质

1.3.6 含硫化合物

1.3.7 其它

1.4 植物提取物抑制病毒的特性

1.4.1 抑制效果受处理方式影响

1.4.2 抑制作用的可传导性

1.4.3 抑制物的稀释限点

1.4.4 抑制物寄主专化性

1.5 植物提取物的作用机理

1.5.1 钝化病毒

1.5.2 诱导植物对病毒产生抗性

1.5.3 降低病毒的扩散速度

1.5.4 诱导抗信号物质的产生

1.5.5 在分子生物学方面的研究

1.5.6 促进植株生长

1.5 植物提取物的有效成分研究存在的问题

2 引言

3 材料与方法

3.1 试验材料

3.1.1 测定生理生化指标的实验材料

3.1.2 测定植物提取液对TMV体外钝化影响的试验材料

3.1.3 植物提取液对感染TMV烟草叶片超微结构影响的试验材料

3.1.4 植物提取液对感染TMV烟草叶片PR影响的试验材料

3.1.5 植物提取液对烟叶农艺性状和烤后烟叶品质影响试验材料

3.2 测定方法

3.2.1 烟株叶片叶绿素含量测定

3.2.2 抗氧化酶活性及苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性的测定

3.2.3 膜脂过氧化指标的测定

3.2.4 总酚类和类黄铜含量的测定

3.2.5 核酸、DNA、RNA含量的测定

3.2.6 植物提取液对TMV体外钝化的测定方法

3.2.7 植物提取液抑制TMV初侵染作用的测定方法

3.2.8 植物提取液抑制 TMV复制作用的测定方法

3.2.9 植物提取液与TMV混合物经透析处理后的致病性测定方法

3.2.10 植物提取液对TMV物理结构的测定方法

3.2.11 植物提取液对TMV-CP的影响测定方法

3.2.12 植物提取液对感染TMV烟草叶片PR的影响的测定方法

3.2.13 防治效果的测定

3.2.15 烟株农艺性状的调查

3.2.16 烤后烟叶品质的测定

4 结果与分析

4.1 植物提取液对TMV寄主的生理生化指标的影响

4.1.1 植物提取液对感染TMV烟草叶绿素含量的影响

4.1.2 植物提取液对感染TMV烟草叶绿素a含量的影响

4.1.4 植物提取液对感染TMV烟草叶片类胡萝卜素含量的影响

4.1.5 植物提取液对感染TMV烟草叶片叶绿素酶活性的影响

4.1.6 植物提取液对感染TMV烟草叶片超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响

4.1.7 植物提取液对感染TMV烟草叶片过氧化氢酶(CAT)活性的影响

4.1.8 植物提取液对感染TMV烟草叶片过氧化物酶(POD)活性的影响

4.1.9 植物提取液对感染TMV烟草叶片超氧阴离子自由基（O2-·）含量的影响

4.1.10 植物提取液对感染TMV烟草叶片羟自由基(·OH)含量的影响

4.1.11 植物提取液对感染TMV烟草叶片丙二醛(MDA)含量的影响

4.1.12 植物提取液对感染TMV烟草叶片总酚含量的影响

4.1.13 植物提取液对感染TMV烟草叶片类黄酮含量含量的影响

4.1.14 植物提取液对感染TMV烟草叶片苯丙氨酸裂解酶(PAL)的活性

4.1.15 植物提取液对感染TMV烟草叶片核酸影响

4.1.16 植物提取液对感染TMV烟草叶片DNA含量的影响

4.1.17 植物提取液对感染TMV烟草叶片RNA含量的影响

4.2 植物提取液对TMV体外活性的影响

4.2.1 植物提取液对TMV体外钝化的影响

4.2.2 植物提取液抑制TMV初侵染作用

4.2.3 植物提取液对TMV复制的影响

4.2.4 植物提取液与TMV混合物经透析后的致病力

4.2.5 植物提取液对TMV粒体形态的影响

4.2.6 植物提取液对病毒外壳蛋白(TMV-CP)的影响

4.3 植物提取液对感染TMV烟草叶片超微结构的影响

4.3.1 不同植物提取液对烟草细胞内TMV的影响

4.3.2 不同植物提取液对烟草叶片细胞超微结构的影响

4.4 植物提取液对感染TMV烟草叶片PR的影响

4.5 配伍制剂对烟草花叶病毒病的防治效果

4.6 配伍制剂处理对烟苗生长的影响

4.7 配伍制剂处理对烤后烟叶化学成分的影响

5 结论与讨论

5.1 植物提取液对感染TMV烟草光合色素含量及相关酶活性的影响

5.2 植物提取液对感染TMV烟草叶片保护酶活性的影响

5.3 植物提取液对感染TMV烟草叶片氧自由基含量的影响

5.4 植物提取液对感染TMV烟草叶片总酚和类黄酮含量的影响

5.5 植物提取液对感染TMV烟草叶片核酸含量的影响

5.6 植物提取液对TMV体外钝化的影响

5.7 植物提取液对TMV粒体形态的影响

5.8 植物提取液对烟草叶片细胞超微结构的影响

5.9 植物提取液对病程相关蛋白(PR蛋白)的影响

参考文献：

附录：