基于分子标记的辣椒杂交种真实性和纯度的检验

摘要

本研究首先优化了DNA提取方法，正交设计优化了SSR-PCR反应体系，采用SRAP和SSR两种分子标记技术，对由河南豫艺种业科技发展有限公司提供的一个辣椒杂交品种(JP-6和H-4两个不同地区待检测的种子)及其亲本自交系，以及待真实性鉴定的三个品种(JP-6、JP-7和JP-9)分别进行纯度的检测和真实性的鉴定。旨在为种质资源鉴定和杂交育种提供一定的理论依据，为现代生物技术应用于传统种子生产提供一个新的方向。本研究结果如下：
　　 1.采用了改良CTAB法和简易碱裂解法提取辣椒子叶部位DNA。结果显示CTAB法提取的DNA质量明显高于简易碱裂解法，但两种方法PCR结果一致，均可以满足SSR-PCR和SRAP-PCR扩增反应体系的需要。碱裂解法因操作简单、需时短、结果稳定，可用于辣椒PCR分析。
　　 2.通过正交设计建立了高效、低成本的SSR-PCR优化体系。试验结果表明：晟适合辣椒SSR-PCR的反应体系是2号组合：Taq DNA聚合酶0.25U、dNTP0.2mmol/L、引物0.3μmol/L、循环次数30次。
　　 3.SSR引物筛选。采用21对SSR引物对辣椒F1代杂交种及其双亲进行PCR扩增筛选，其中有一对引物(CA885)在双亲和杂种F1中存在多态性，可区别双亲和F1。对这一引物进行重复扩增检测，扩增结果稳定。
　　 4.杂交种一代纯度鉴定。利用筛选出的引物CA885对JP-6和H-4两份辣椒品种F1杂交种96株单株分别进行纯度鉴定，结果分别为90.6％和86.0％。将JP-6和H-4的种子分别播种于田间，得到田间纯度检测结果分别为90.6％和91.3％，分子标记的检测结果与田间鉴定结果相近或稍低。
　　 5.三个辣椒品种真实性SRAP标记鉴定。利用高多态性16对SRAP引物对JP-6、JP-7和JP-9三个辣椒品种的父母本进行扩增，通过带谱的比对发现：JP-6和JP-7是同一个品种，而JP-9与JP-6、JP-7不是相同品种。