河南省禽规模化养殖场鸡传染性支气管炎分子流行病学调查及其防控

摘要

鸡传染性支气管炎(IB，infectious bronchitis)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV, infectiousbronchitis virus)引起的传染性疾病。IBV易变异、血清型众多及其组织嗜性多样的特点，常导致临床上防控IB的失败，造成严重的经济损失。鉴于此，为更好的在家禽生产中防控IB，本研究对河南地区IB进行了流行病学调查，并对典型案例进行病毒分离，采用制备自家疫苗的方式进行综合防控，现将结果报告如下:
　　对河南省2012年-2013年两年的临床病例统计以及21个市区或直辖市家禽规模化养殖场共采集的335份疑似IB病料，进行分子流行病学调查。采用RT-PCR方法针对IBV保守的N基因进行流行病学调查。335份病料总阳性率为17.91％(95％CI14.0-22.40)，其中2012年为18.09％(95％CI12.9-24.3)，2013年为17.69％(95％CI11.9-24.8)。河南省大部分地市均有不同程度的IBV感染情况出现，在养殖密度相对较大的地区，阳性率普遍高于其他地区。2012年主要集中在7-9月份;2013年主要集中在1-6月份。2012-2013年IBV感染情况均集中在0-60日龄的雏鸡，感染率为30.15％(95％CI22.6-38.6)，60-120日龄感染率为16.18％(95％CI8.4-27.1)，120日龄以上的产蛋鸡总感染率6.11％(95％CI2.7-11.7)。
　　为了从基因水平了解河南省IBV遗传变异情况，利用实验室保存的引物对阳性鸡胚尿囊液中IBV S1基因的扩增及序列测定，得到3个IBV S1的基因序列，分别为HN LH株、HN LY株和HN XYHL株，另外2个毒株cK/CH/HN/1205株和Jin-13株，为实验室保存的参考毒株。与国内外不同地区IBV S1基因进行核苷酸和氨基酸同源性比较分析，并构建遗传进化树。通过比较发现HN LY株与市场上H120、H52及W93等呼吸型疫苗株同源性在99.5％至99.6％之间，亲缘关系较近，可能是疫苗株变异引起的感染;Jin-13株与山东分离株SDA株亲缘关系较近，可能是两省均为养殖大省且在地理位置上紧密联系，相互之间存在着家禽及其产品的的频繁且广泛的交流所致;cK/CH/HN/1205株、HN LH株和HN XYHL株处于同一分支，与国内肾型代表分离株LX4亲缘关系较近，同源性在94.9％至97.2％之间，以上结果显示，在基因水平上，河南及其周边地区存在不同进化分支的IBV毒株，田间流行的IBV毒株呈现多态性变化。这其中HN LH株和HN XYHL株亲缘关系更近，同源性达到97.2％。了解河南省IBV流行毒株的特异性，为河南省鸡传染性支气管炎的防治提供了科学参考。
　　根据以上研究结果，选取具有代表性的HN XYHL株制备油乳剂灭活疫苗，经质量检验合格后，对荥阳市种鸡场进行防疫，首次免疫时间8日龄，2周后进行二免。同时改善饲养环境、调整免疫程序，配合药物保健及控制继发感染等综合防控措施。同时以血凝试验和中和试验检测抗体结果，并结合鸡群的生产指标为该油乳剂灭活苗免疫效果进行评估的依据，最终较好防控了该病。流行毒株油乳剂灭活苗的应用很好的解决了目前IB难以防控的问题，为河南省地方流行毒株的预防控制提供科学依据。

目录

声明

致谢

摘要

文献综述

1 鸡传染性支气管炎背景简介

1．1 鸡传染性支气管炎病毒病原学特性

1．2 鸡传染性支气管炎的流行病学

1．3 鸡传染性支气管炎致病的分子机制及临床症状

2 鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

2．1 IBV的基因组结构

2．2 鸡传染性支气管炎病毒的主要功能蛋白及生物学功能

3 鸡传染性支气管炎疫苗研究现状

3．1 灭活苗

3．2 活疫苗

3．3 基因工程疫苗

4 鸡传染性支气管炎的防控

试验一 鸡传染性支气管炎分子流行病学调查

摘要

引言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 IBVN基因的扩增

2．2 IBV流行病学调查结果

3 讨论

试验二 五个IBV河南省地方流行株S1基因的序列分析

摘要

引言

1 材料方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 胚接种试验结果

2．2 IBV S1基因的扩增

2．3 质粒鉴定

2．4 IBV S1基因序列分析

3 讨论

试验三 IBV地方流行毒株灭活油乳剂疫苗的制备及其防控

摘要

引言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 EID50的测定

2．2 中和试验结果

2．3 HI试验结果

2．4 IB的综合防控

3 讨论

全文总结

参考文献