“痰壅胞宫”的生物学基础及其效应—2基于db/db小鼠卵巢功能障碍的研究

摘要

目的：祖国医学认为痰湿型不孕症的病因病机为“痰壅胞宫”，即痰浊壅塞胞宫，现代医学认为痰浊的生物学基础是糖脂代谢的异常，db/db小鼠具有糖脂代谢异常，生殖功能障碍等特点，符合“痰壅胞宫”不孕症的症候特征，因此我们选择db/db小鼠进行基础实验研究，探索引起痰浊患者生殖功能障碍的原因，证明“痰壅胞宫”理论的正确性，同时明确卵巢内瘦素信号系统的传导途径和卵巢局部瘦素信号缺失对卵巢自身功能的影响。 方法： ①雌性B6．Cg-m+/+Lepr<'db>小鼠和其同窝出生的雌性野生型C57BL/6J小鼠以1∶2的比例购买于南京大学模式动物中心，单笼饲养，控制饲养环境。于出生后12周体成熟时期对瘦素长受体缺失(LR－)的雌性B6．Cg-m+/+Lepr<'db>小鼠和其同窝出生的有完整LR的雌性野生型C57BL/6J小鼠(LR+)，进行卵巢交互移植，构建实验小鼠的LR基因型组合分别为A(躯体LR+，卵巢LR－)、B(躯体LR+，卵巢LR－)、C(躯体LR+，卵巢LR+)、D(躯体LR－，卵巢LR+)、E(躯体LR－，卵巢LR－)共5组(n=5)。 ②每日给予B组小鼠腹腔注射盐酸小檗碱，连续两周，检测各自卵巢的周期变化。 ③瘦素(1μg/g) 刺激试验后取材，检测全身糖脂代谢指标和生殖激素、HE染色法检测卵巢内脂质化情况及卵巢组织形态功能的变化，免疫组化法检测卵巢内瘦素传导信号蛋白包括瘦素(ob)、瘦素长受体(ob-Rb)、Janus激酶(JAK2)、信号传导和转录活化因子3 (stat3)、磷酸化的stat3 (p-stat3)、活化的STAT3蛋白抑制剂(PIAS3)、细胞因子转导信号抑制物3(socs3)的表达；RT-PCR法检测瘦素长受体(ob-Rb)和socs3 mRNA的表达。 结论： 1、卵巢内存在完整的瘦素信号传导系统，但是卵巢局部瘦素信号传导缺失并不影响卵巢自身的生殖及内分泌功能； 2、db小鼠卵巢功能障碍主要是高糖脂血症累及生殖器官导致其脂质化引起； 3、由此可见，“痰壅胞宫”可以引起临床痰湿型不孕症患者生殖功能障碍这一理论是正确的，而糖脂代谢异常是“痰壅胞宫”的生物学基础。

目录

论文说明：缩略语表

声明

摘要

前言

综述

一、对痰湿型不孕的病因病机的认识

第一节古代医家对痰湿型不孕的病因病机的认识—“痰壅胞宫”

第二节痰湿型体质的生物学基础

二、db/db小鼠与痰湿型不孕症

第一节db/db小鼠生物性状的研究

第二节db/db小鼠的生物学表型符合痰湿型不孕症

第三节瘦素及其诱导的信号传导途径

第四节中药小檗碱改善糖脂代谢的作用机理

第五节概述

参考文献

实验方法

db/db小鼠糖脂代谢紊乱和卵巢功能障碍机理的探讨

1.小鼠卵巢移植模型的构建

2.移植后小鼠卵巢功能的监测

3.中药小檗碱的作用及随后的动力学实验

4.血清内生殖激素和糖脂代谢指标的测定

5.常规病理

6.动态实验刺激后，各关键信号蛋白的免疫组化定位表达

7.RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）

讨论

结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士期间发表的论文

个人简历