三种基因型桃不同外植体再生能力初探

摘要

桃是我国重要的经济树种。传统桃树育种由于受到育种周期长、工作量大等因素的限制导致进程缓慢。现代生物技术，尤其是植物组织培养和基因工程的发展，为快速进行桃性状改良提供了可能。高效稳定的再生体系是进行转基因技术的基础，但是桃属于李属（Prunus SPP.）果树中离体再生比较困难的树种，影响再生的因素成为研究的关键，基因型、植物生长调节剂、基本培养基、培养条件等均对桃的再生有影响。本研究以‘黄水蜜’、‘秋蜜红’和毛桃田间材料初代培养的叶片及胚培苗的茎段、叶片、子叶、上胚轴为外植体，建立桃不同外植体再生体系，为桃遗传转化研究奠定基础。主要研究结果如下：
　　1.三种基因型桃无菌材料的获得
　　本试验研究了取材时期和接芽状态、灭菌方法和培养基四个方面对初代培养的影响，结果表明：采芽接种最适宜的时期为4月下旬；将‘黄水蜜’露出5~7片叶的腋芽的茎段用升汞处理6 min后，接种到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分别为11.1％和为58.7%；将‘秋蜜红’刚抽生嫩梢的茎段用升汞处理7 min后，接种到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分别为16.7%和24.3%；将毛桃露出5~7片叶的腋芽的茎段用升汞处理7 min后，接种到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分别为19.4%和55.7%；
　　2.三种基因型桃不同外植体离体再生的研究
　　（1）茎段离体再生
　　以‘黄水蜜’桃胚培苗茎段为外植体，探讨了不同植物生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响，并采用两步生根法研究不同植物生长调节剂种类对不定根诱导的影响。结果表明，适合‘黄水蜜’桃胚培苗茎段切口处愈伤组织再生的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L，不定芽再生的最佳培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L，其愈伤组织形成率和不定芽再生率分别为85%和47%；获得的不定芽先后经WPM+ ZT2.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L和MS+ NAA0.5 mg/L+ GA30.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L两步生根法培养后，不定根再生率为50%，平均根数为5.00。初步建立了‘黄水蜜’桃胚培苗茎段再生体系，为桃遗传转化研究奠定基础。
　　（2）叶片离体再生
　　本试验研究了不同植物生长调节剂对桃叶片愈伤组织形成率的影响，试验结果表明：诱导初代培养桃叶片产生愈伤组织的最佳培养基为MS+ ZT3.0 mg/L+2,4-D0.6 mg/L+AgNO30.5 mg/L，其中毛桃、‘黄水蜜’和‘秋蜜红’，愈伤组织形成率最高分别可达93.3%、70.0%和47.7%，褐化率最低分别为37.3%、50.3%和48.0%；
　　本试验研究了不同植物生长调节剂对‘黄水蜜’、‘秋蜜红’和毛桃三种不同基因型胚培苗叶片愈伤组织形成率和愈伤组织形态的影响，结果表明：愈伤组织形成率可达100%，根据愈伤组织形态得出胚培苗叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+ ZT4.0mg/L+2,4-D0.8 mg/L+ AgNO30.5 mg/L；
　　（3）子叶离体再生
　　取培养45 d左右的‘黄水蜜’、‘秋蜜红’和毛桃三种不同基因型胚培苗子叶，横切2~3刀，远轴面接触培养基接种至MS+ NAA0.1 mg/L+ TDZ2.0 mg/L+ AgNO30.5 mg/L培养基，培养45 d后发现只有‘秋蜜红’部分子叶切口处产生不定芽；
　　（4）上胚轴离体再生
　　取培养45 d左右的‘黄水蜜’、‘秋蜜红’和毛桃三种不同基因型胚培苗，每个胚培苗切取1~2个上胚轴切段，切成1~2 cm长的切段，接种至MS+ NAA0.1 mg/L+6-BA2.0 mg/L+ AgNO30.5 mg/L的培养基中，培养30 d左右发现只有‘秋蜜红’切口处部分芽点生长成为不定芽。

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缩略词表 Abbreviation

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第一章 文献综述

1桃资源概况

2 桃组织培养研究进展

2.1茎尖培养

2.2胚培养

2.3叶片培养

2.4胚轴培养

2.5子叶培养

第二章 三种基因型桃无菌材料的获得

1 引言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 试验方法

2.3 数据统计与分析

3 结果与分析

3.1 桃的初代培养

4 讨论与结论

4.1 讨论

4.2 结论

第三章 三种基因型桃不同外植体离体再生的研究

1 引言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 试验方法

2.3 数据统计与分析

3 结果与分析

3.1 茎段离体再生

3.2 叶片离体再生

3.3 离体子叶诱导再生不定芽

3.4 上胚轴再生不定芽

4 讨论与结论

4.1 讨论

4.2 结论

参考文献

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