西瓜未授粉子房离体培养技术的研究

摘要

西瓜在中国栽培面积十分广泛，需求量大。但西瓜的遗传基础狭窄，常规育种的周期长、工作量大、遗传性状的不稳定和不易获得目标性状等因素在很大程度上限制了西瓜的育种进程。西瓜未授粉子房离体培养途径可以产生单倍体或双单倍体植株，进而获得纯合的自交系，缩短育种周期。本试验以4个杂种一代西瓜品种为供试材料，利用材料的未授粉子房为外植体，主要研究了暗培时间、次氯酸钠溶液浓度及消毒时间、不同基本培养基与TDZ、NAA、BA和KT不同浓度组合对胚珠膨大率的影响，同时对影响西瓜未授粉子房离体培养诱导再生植株的主要因素如基因型和诱导培养基做了试验探索，并对得到的再生植株进行了倍性鉴定。本研究的目的是进一步完善和优化西瓜未授粉子房离体培养技术，使该项技术逐渐成熟进而应用到西瓜的育种工作中。试验主要研究结果如下:
　　1次氯酸钠溶液浓度和消毒时间对胚珠的诱导膨大率产生一定的影响，试验结果表明10％的次氯酸钠溶液消毒10min对诱导胚珠膨大的效果最好。
　　2暗培时间的长短影响着胚珠膨大的诱导效果，虽然暗培7d和14d对胚珠的膨大率没有显著差异，但都显著高于没有进行暗培处理的胚珠膨大率，因此可以适当增加暗培时间来提高胚珠的诱导率。
　　3基本培养基中营养成分的变动也会对胚珠的诱导率产生影响，M2基本培养基本中的有机物质含量较高，本试验的研究发现M2培养基上的胚珠诱导效果最好，且再生植株也是在M2培养基上获得的。
　　4采用正交设计的试验方法对不同种类、浓度的激素组合进行了筛选，表明激素对西瓜未授粉子房离体培养是必要的，当TDZ浓度为0.04-0.08mg/L，NAA浓度为0.5mg/L，BA和KT的浓度都偏低时，对诱导胚珠膨大的效果较好;在MS+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT分化培养基上，有利于诱导膨大胚珠分化出胚状体。
　　5改良后的诱导培养基M2+0.02TDZ+0.5NAA+0.56-BA，诱导分化出了胚状体，并且得到了完整的再生植株。
　　6西瓜基因型对未授粉子房离体培养诱导胚状体具有一定的影响作用，供试的3个不同基因型材料胚状体诱导率之间存在着差异，胚诱导率最高为1.67％，最低为0。
　　7试验得到了4棵完整的再生植株，用流式细胞仪对再生植株进行了倍性鉴定，结果表明有1株再生植株是四倍体植株，其余3株是单倍体和二倍体的嵌合体植株。

目录

声明

致谢

摘要

1．文献综述

1．1 植物未受精子房和胚珠的研究历史和现状

1．2 影响葫芦科作物离体雌核培养效果的因素

1．2．1 供体植株的基因型

1．2．2 供体植株的生长季节与胚囊的发育程度

1．2．3 培养基类型

1．2．4 外源激素

1．2．5 接种方式与培养条件

1．3 胚囊再生植株倍性鉴定

1．3．1 直接鉴定法

1．3．2 间接鉴定法

2 引言

3 材料与方法

3．1 技术路线

3．2 试验材料

3．3．2 外植体的预处理

3．3．3 不同因素对未授粉子房离体培养诱导胚珠膨大影响的试验

3．3．4 不同因素对未授粉子房离体培养胚状体诱导影响的试验

3．3．5 再生植株的倍性鉴定

3．3．6 数据处理

4．1 不同因素对未授粉子房离体培养诱导胚珠膨大的影响

4．1．1 次氯酸钠浓度与消毒时间对诱导胚珠膨大的影响

4．1．2 暗培时间对诱导胚珠膨大效果的影响

4．1．3 基本培养基和不同激素种类与浓度对胚珠膨大效果的影响

4．1．4 分化培养基对诱导膨大胚珠分化的影响

4．2 不同因素对胚状体诱导的影响

4．2．1 诱导培养基对胚状体诱导的影响

4．2．2 基因型对胚状体诱导效果的影响

4．3 再生植株的倍性鉴定

5 结论与讨论

5．1 结论

5．1．1 次氯酸钠浓度与消毒时间对诱导胚珠膨大的影响

5．1．2 暗培时间对诱导胚珠膨大的影响

5．1．3 基本培养基诱导胚珠膨大和胚状体的影响

5．1．4 激素种类与浓度对诱导胚珠膨大和胚状体的影响

5．1．5 分化培养基对诱导膨大胚珠分化的影响

5．1．6 基因型对诱导胚珠膨大和胚状体的影响

5．1．7 再生植株的倍性鉴定

5．2．1 次氯酸钠溶液浓度和消毒时间对胚珠膨大率的影响

5．2．2 暗培时间对诱导胚珠膨大的影响

5．2．3 基本培养基对诱导胚珠膨大和胚状体诱导的影响

5．2．4 激素种类及浓度对诱导胚珠膨大和胚状体诱导的影响

5．2．5 分化培养基对诱导膨大胚珠分化的影响

5．2．6 基因型对诱导胚珠膨大和胚状体的影响

5．2．7 再生植株的倍性鉴定

参考文献

缩略语表