mdm2、Rb在胃癌中的表达及mdm2基因表达抑制与胃癌细胞增殖的关系

摘要

目的： 通过检测癌基因mdm2和抑癌基因Rb在胃癌及胃黏膜异型增生中的表达情况，并观察运用RNA干涉技术抑制mdm2基因的表达后肿瘤细胞的增殖情况，以了解在细胞周期中起重要作用的癌基因mdm2及抑癌基因Rb在胃癌发生，发展中的作用，探讨可否将mdm2作为胃癌治疗的潜在靶点。 方法：采用免疫组化S-P法测定正常胃黏膜、轻度异型增生、中度异型增生、重度异型增生、早期胃癌、进展期胃癌组织中mdm2和Rb的表达情况。应用RNA干涉技术（RNAi）研究针对mdm2基因的siRNA，抑制mdm2基因的表达并诱导胃癌细胞系SGC7901细胞的凋亡。将mdm2 siRNA转染入SGC7901中，通过RT-PCR检测 转染前后各组细胞mdm2 mRNA表达水平，Western-blot技术检测转染前后各组细胞mdm2、Rb蛋白表达水平，在转染后不同时间点收集细胞台盼蓝染色后，计数阳性细胞数，统计细胞增殖情况。 结果：mdm2蛋白在正常胃黏膜、轻度异型增生及中度+重度异型增生胃黏膜、早期胃癌、进展期胃癌组织中的阳性表达率分别为33.3％、40.0％、43.8％、 55.6％、57.9％；Rb的阳性表达率分别为94.4％、100％、81.3％、55.6％、63.2％。Rb在轻度异型增生胃黏膜的表达率与早期胃癌及进展期胃癌相比差异有统计学意义（P<0.05）。Mdm2在浸润深度达浆膜组的表达率高于浸润深度达肌层组（P<0.05）；mdm2在淋巴结转移组的阳性率高于淋巴结未转移组的阳性率（P<0.01）。Rb的表达与临床病理特征无关。56例胃癌组织中，mdm2和Rb共同阳性10例，共同阴性5例，表达一致者15例，不一致者41例，mdm2阳性Rb阴性者22例，mdm2阴性Rb阳性者19例。采用Spearman等级相关分析，γs =-0.475，P<0.01，说明两者表达有负相关关系。转染mdm2 siRNA 48小时后SGC-7901细胞的mRNA表达量与阴性对照组之间的差异有显著性意义(n=3, P<0.01)。24h、48h、72h、96h mdm2 mRNA的量仅为正常对照组的70.57％、52.04％、31.38％和42.26％。siRNA mdm2转染后的细胞中mdm2蛋白表达水平较转染阴性对照细胞组和未转染细胞组的mdm2蛋白表达水平明显降低。Mdm2 mRNA表达下调后，在蛋白质层次上引起mdm2表达下调，Rb蛋白表达上调。Bandscan图像系统分析结果所示：以SGC-7901细胞对照组的mdm2/GAPDH蛋白带为标准（亮度定为100），其他几组与之比较，转染阴性对照siRNA mdm2的条带强度为98％，干涉后24h、48h、72h、96h的条带强度分别为68.42％、52.15％、33.45％、45.86％。Rb蛋白表达的图像分析相应结果为：正常SGC-7901细胞对照组条带强度为41.64％，转染阴性对照siRNA mdm2的条带强度为43.97％，干涉后24h、48h、72h、96h 的条带强度分别为45.42％、45.15％、69.45％、65.86％ 。分别在转染后不同时间点收集细胞，台盼蓝染色，计数非着色细胞，统计细胞增殖情况。发现siRNA mdm2转染的细胞较阴性对照组，空白对照组细胞相比，增殖受到明显抑制。 结论：1．Rb基因在早期胃癌中的表达率明显低于轻度异性增生病变中的表达率，提示Rb基因在胃黏膜恶变过程中扮演重要的角色，可作为胃黏膜病变进展的监测指标，应用于胃黏膜高危人群的随访检测，以期提高早期胃癌发现率。 2．Mdm2在胃癌侵犯深度不同的患者中的阳性表达率有统计学差异（浆膜层组高于肌层组，P<0.01），淋巴结转移组的阳性率高于淋巴结未转移组（P<0.05）。提示mdm2表达阳性的肿瘤具有更强的浸润及转移能力。 3．Mdm2在胃癌前病变中的表达率随病变的进展逐渐升高，而Rb表达率则随病变的进展呈下降趋势，两者在胃癌中的表达呈负相关（P<0.01）。 4．应用RNA干涉技术能特异性沉默mdm2基因表达，同时上调Rb蛋白表达，mdm2基因与Rb基因之间存在着某种相互拮抗作用，mdm2作为一个潜在的分子作用靶点在肿瘤治疗中具有一定的价值。