禽霍乱ptfa基因PCR检测方法的研究

摘要

禽霍乱，又被称为禽出血性败血症或者禽多杀性巴氏杆菌病，是由多杀性巴氏杆菌引起的一种禽类传染病。多杀性巴氏杆菌对药物和阳光、干燥抵抗力不强，因此该病多发生于闷热、潮湿的环境条件下，各种家禽，如鸡、火鸡、鹅、鸭等都可感染，且本病的发病率和死亡率都很高。家禽感染禽霍乱后，主要是采用抗生素治疗，可能会导致禽肉制品中抗生素残留量过高。
　　目前，人们对禽霍乱的诊断，多数仍旧依据临床症状和分离病原菌来判断，虽然这种传统的方法能取得可靠的结果，但这些方法的工作量大，操作繁琐，需要花费较长的时间，对禽霍乱爆发流行时的诊断和疾病控制都不利，因此急需研究一种快速、特异、敏感的诊断检测方法。
　　本实验以禽多杀性巴氏杆菌 CVCC474菌株作为研究对象，提取该菌的基因组，根据 GenBank中已发表的禽多杀性巴氏杆菌的 ptfa的基因序列，设计和合成了一对特异性引物，建立了一种基于禽多杀性巴氏杆菌 ptfa基因的 PCR检测方法，并对 PCR反应的退火温度、循环次数、引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度五个反应参数进行优化，检测了该方法的特异性和敏感性。结果成功扩增出了禽多杀性巴氏杆菌435bp的 ptfa特异性基因片段，而对鸡致病性大肠杆菌、鸡金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌三种病原菌均未扩增出相应片段。敏感性试验结果表明本方法可检测到最低1pg/μL的禽多杀性巴氏杆菌基因组DNA。本试验为禽多杀性巴氏杆菌病快速检测方法的研究奠定了一定的基础，为我国禽肉制品的安全性作出一定的贡献。

目录

第1章文献综述

1.1禽霍乱概述

1.2禽霍乱病原的特性

1.3禽霍乱症状及病理变化

1.4禽霍乱诊断方法

1.5禽霍乱的防治

1.6禽霍乱PCR检测研究进展

1.7本研究的工作基础、意义和主要内容

第2章ptfa基因PCR反应条件优化

2.1实验材料

2.2试验方法

2.3结果与分析

2.4讨论

第3章PCR反应特异性及敏感性试验

3.1试验材料

3.2试验方法

3.3结果与分析

3.4讨论

第4章结论

参考文献

缩略语词汇表

附录A 序列比对

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果