自发性脑出血中红细胞对AQP-4的影响及其与血脑屏障通透性的关系

摘要

背景：自发性脑出血(SICH)是指在非外伤所致的大脑实质内突然自发性的出血，是临床上致残、致死率很高的神经系统常见的疾病之一。在亚洲国家占脑卒中的20％～30%，但是其死亡率却是最高，而导致脑出血死亡率高的主要原因之一就是脑水肿，自发性脑出血后血肿的不断扩大是导致患者的病情渐恶化的主要原因。SICH后脑水肿的形成机制至今尚未阐明。研究显示，SICH后血肿中的主要成分（本课题拟研究红细胞）与出血后不同阶段脑水肿的形成关系密切，并且水通道蛋白4（AQP-4）在脑组织中水的运转过程中起着重要作用。本课题从红细胞对脑水肿形成和对 AQP-4表达影响的角度来研究在 SICH中，红细胞与脑水肿形成、AQP-4的表达、血脑屏障（BBB）通透性之间的关系，以期为SICH后脑水肿防治方面提供实验和理论依据，这是本课题的创新之处，目前国内外尚未见报道。
　　目的：
　　1．阐明SICH中，红细胞对AQP-4表达的影响；
　　2．探讨SICH后脑水肿形成过程中，AQP-4的表达与BBB通透性的关系。
　　方法：本实验动物模型选用健康成年清洁级 SD（ Sprague Dawley）大鼠共195只，雄性，体重约210～300g，由河南科技大学医学院动物实验中心提供。将SD大鼠随机分为四组；即红细胞（RBC）组，全血（WB）组、假手术（SO）)组、正常对照（NC）组。其中 RBC组、WB组、SO组按处死时间（6h、1d、3d、5d）再分为四个亚组，每组15只（5只测脑水含量、AQP-4mRNA，5只用于检测水肿区域病理改变和AQP-4阳性细胞分布情况，5只用于检测EB含量）。制作模型：用脑立体定位仪向各组 SD大鼠右侧尾状核注入自体 WB或 RBC以建立 SICH模型，并按 Bederson方法判断模型是否成功。采集标本，检测脑组织依文思蓝（EB）含量；AQP-4 mRNA变化；脑含水量；HE染色及免疫组化AQP-4的阳性细胞分布情况。
　　结果：
　　1．脑组织EB含量：在RBC、WB、SO、NC组6h、1d、3d、5d的组内比较，其中在 RBC组-3d显著高于6h、1d、5d组；组间相比，RBC组-6h时出现升高，第1d时升高明显，3d达到高峰，5d时降低但仍高于正常水平，WB组与 RBC组在各时间点 EB含量变化规律相似，但均低于RBC组；SO组与NC组比较无差异。
　　2．脑含水量检测：在 RBC组内不同时间点相比，其第3d时结果提示显著比6h、1d、5d组高；组间相比，RBC与WB组各时间点间相比，其脑组织水含量变化趋势规律基本相似，但WB组稍低于RBC组。
　　3．RT-PCR检测AQP-4 mRNA表达：RBC组内各时间点相比，RBC组-3d显著高于6h、1d、5d组，RBC组-6h后脑组织AQP-4 mRNA表达开始增高，第3d达到高峰，之后逐渐下降，在第5d时仍高于正常水平；WB组与RBC组AQP-4 mRNA的表达规律基本相似，但低于RBC组。
　　4．免疫组化检测 AQP-4表达结果示：RBC组和 WB组的3d时都可见AQP-4在神经胶质细胞以及其足突的表达，其胞浆呈棕黄着色。
　　结论：
　　1.脑组织水含量在RBC组和WB组在第3d时最高，提示RBC在SICH后第3d脑水肿的形成中有作用，说明RBC是SICH后脑水肿形成过程中的重要物质基础。
　　2.在 RBC组和 WB组第3d时 AQP-4阳性表达最强，提示 RBC可引起AQP-4的表达。
　　3. BBB通透性在RBC组和WB组的通透率最高，而且从6h时开始出现升高，第3d达到高峰，说明SICH后RBC影响BBB通透性。
　　4.综合 AQP-4表达、脑水含量、EB检测的结果，AQP-4的阳性表达与脑含水量、BBB通透性的变化一致，即 RBC组和 WB组第3d时脑含水量和 EB含量最高，同时AQP-4的阳性表达最强。说明三者的变化趋势一致，提示SICH第3d脑水肿的加重与BBB通透性的增加和AQP-4的阳性表达增强关系密切。

目录

声明

第1章 绪论

1.1 研究背景

1.2 研究目的

1.3 研究意义

第2章 材料与方法

2.1 材料来源和主要设备

2.2 实验方法

2.3 检测方法

2.4 统计学方法

第3章 结果

3.1 实验动物情况

3.2 病理学检测

3.3 免疫组化检测AQP-4蛋白

3.4 脑组织EB含量的变化

3.5 AQP-4 mRNA的表达

3.6 脑组织含水量的变化

第4章 讨论

4.1 动物模型

4.2 SICH后脑水肿形成过程中红细胞的作用

4.3 SICH后脑水肿过程中与BBB通透性的关系

4.4 SICH后脑水肿形成过程中AQP-4的作用

4.5 结语

第5章 结论

参考文献

缩略语词汇表

附录 附图

致谢

攻读学位期间的研究成果