高氟干扰T淋巴细胞分化定向蛋白质相互作用研究

摘要

地氟病作为目前我国流行最广泛，并且严重危害到人类健康与动物生命的一种的地方病和多发病，是由长时间摄入高浓度的氟引起的。大量研究表明，高氟可造成机体的广泛性损伤，包括免疫系统。本研究通过向小鼠饮水中添加不同剂量的氟（0mg/L，50mg/L，100mg/L）建立动物模型。采用透射电镜、流式细胞术、iTRAQ和Real-time PCR等技术，从血清学，组织病理形态学，细胞生物学和蛋白组学等角度研究了高氟的免疫毒性作用。具体结果如下：
　　1．氟对小鼠血常规和胸腺超微结构的影响高氟可抑制小鼠的体增重，并造成胸腺超微结构的损伤，表现为核染色质减少、固缩，细胞膜核膜的双层膜结构不明显，细胞质浓缩出现空泡化，线粒体脊断裂、结构破坏等。血常规检查结果显示高氟可导致小鼠的外周血 WBC数、淋巴细胞数、中间细胞数和粒细胞数目显著下降，改变淋巴细胞及粒细胞的比例，表明氟可以影响机体的免疫状态，这与胸腺损伤的结果相一致。
　　2．氟对小鼠 T细胞亚群的的影响采用流式细胞术检测小鼠胸腺 T细胞亚群的变化，结果显示，高剂量的氟可导致胸腺 CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的比例下降，且差异显著，而 DP细胞在两个氟处理组内的比例上升，DN细胞在氟处理组中有下降趋势，证实了高氟可以影响胸腺 T细胞的分化，抑制了 CD4+或CD8+单阳性细胞的生成。
　　3．氟对小鼠胸腺蛋白质与蛋白质相互作用的影响 iTRAQ实验结果显示，高氟诱导350多个蛋白发生差异表达。进一步的生物信息学分析表明，这些蛋白主要分布于110多个信号通路，其中参与细胞代谢的有30多条，涉及70多个差异蛋白；参与信号调控通路的有50多，涉及160多个差异蛋白，参与疾病发生的有19条通路，涉及60多个蛋白。这些蛋白表达的紊乱可以影响胸腺细胞的生物过程，进而干扰T细胞的分化。
　　4．氟对小鼠T细胞分化关键基因mRNA表达的影响实时荧光定量PCR技术验证差异蛋白 mRNA表达影响的结果显示，高氟可抑制 Rps3、Rps3a及Pfn1 mRNA的表达，并促进 Nefh和 Nefm的 mRNA表达，与蛋白表达检测结果相一致。
　　综上所述，高氟可以造成胸腺超微结构的损伤，并影响胸腺 T细胞分化发育，引起大量胸腺内蛋白的差异表达。本试验从蛋白组学的角度出发，研究了高氟对 T淋巴细胞分化的影响，为进一步阐明氟干扰 T细胞分化定向的机制奠定了基础。

目录

声明

符号表

第1章 文献综述

1.1 氟中毒研究进展

1.2 胸腺与T淋巴细胞的分化

1.3 氟中毒与T细胞免疫

第2章 氟中毒动物模型的建立与评价

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

第3章 高氟对胸腺T淋巴细胞分化的影响

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

第4章 高氟干扰小鼠T细胞分化的蛋白组学分析

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

第5章 氟暴露小鼠胸腺关键差异表达基因mRNA表达研究

5.1 材料

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

第6章 结论

参考文献

缩略语词汇表

致谢

攻读学位期间的研究成果