洛阳市烟田腐霉菌与烟草根际拮抗放线菌的鉴定

摘要

腐霉菌侵染茄科、葫芦科与十字花科等多种植物引起猝倒病，在烟草成株期侵染造成茎黑腐病，该病常与黑胫病、根黑腐病、镰刀菌根腐病等混合发生，使烟叶产量降低，品质变劣，影响商品价值。为明确洛阳市烟草土壤中腐霉菌与拮抗放线菌种类，试验以洛阳市宜阳、洛宁、汝阳与嵩县不同植烟年限的烟田土样为研究对象；采用月季花瓣诱饵法分离腐霉菌，形态学结合rDNA-ITS序列分析鉴定腐霉菌的种类，针刺法测定其致病性；利用稀释平板法分离样品中的放线菌，平板对峙培养法并结合其发酵液抑菌活性测定筛选拮抗放线菌；通过革兰氏染色反应、形态特征观察、生理生化特征测定并结合16S rDNA序列分析鉴定拮抗放线菌的种类。结果如下：
　　（1）从供试土壤样品中分离获得腐霉菌135株，大田土样占64株，根际土样占71株。
　　（2）135株腐霉菌隶属8个种，分别是瓜果腐霉P. aphanidermatum(Edson) Fitzpatrick，固执腐霉P. recalcitrans Maralejo，德巴利腐霉P. debaryanum Hesse，终极腐霉P. ultimum Tom，棘腐霉P. acanthium Drechsler，寡雄腐霉P. oligandrum Drechsler，异宗腐霉P. heterothallicum Hendrix，卡地腐霉P. carolinianum Matthews。
　　（3）瓜果腐霉，德巴利腐霉，终极腐霉，固执腐霉能够侵染烟草，发病率分别是93.3％、33.3%、66.7%、86.7%，其中固执腐霉对烟草致病为首次发现。
　　（4）采用稀释平板法分离放线菌，从30份根际土样中共分离获得256株放线菌。
　　（5）140株放线菌菌株对瓜果腐霉、烟草疫霉和尖孢镰刀菌具有拮抗作用，其中对三种病原菌均有拮抗作用的有27株。
　　（6）从16株拮抗作用较强的放线菌中鉴定得到13个种，分别是金黄垂直链霉菌Streptomyces aureoverticillatus、小串链霉菌S.catenulae、林肯链霉菌S. lincolnensis、菌核链霉菌S. sclerotialus、暗蓝色链霉菌S. caeruleatus、黑孢链霉菌S. melanosporofaciens、黄三素链霉菌S. flavotricini、雀黄链霉菌S. canarius、微黄绿链霉菌 S. flavidovirens、黄麻链霉菌 S. corchorusi、欧洲疮痂链霉菌 S. europaeiscabiei、加利利链霉菌S. galilaeusi及草地链霉菌S. pratensis。
　　本研究在形态学与分子生物学水平上揭示了洛阳市烟田腐霉菌的多样性，首次发现固执腐霉为侵染烟草的新病原，为控制烟草猝倒病与茎黑腐病提供了重要的理论依据；在形态学、生理生化与分子生物学水平上鉴定了洛阳烟田根际土壤中拮抗放线菌的种类，测定了放线菌对烟草土传病原菌的室内拮抗效果，可为进一步研究与利用放线菌控制烟草病害提供重要参考。

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第1章 文献综述

1.1 腐霉菌研究概述

1.2 拮抗放线菌研究概述

1.3 本研究的目的及意义

第2章 烟田腐霉菌的分离和鉴定

2.1 材料与方法

2.2 结果与分析

2.3 小结与讨论

第3章 烟草根际拮抗放线菌的分离与筛选

3.1 材料与方法

3.2 结果与分析

3.3 小结与讨论

第4章 拮抗放线菌的形态及生理生化特征

4.1 材料与方法

4.2 结果与分析

4.3 小结与讨论

第5章 拮抗放线菌的分子鉴定

5.1 材料与方法

5.2 结果与分析

5.3 小结与讨论

第6章 结论

参考文献

缩略语词汇表

附录Ⅰ 烟田腐霉菌菌落及显微特征

致谢

攻读学位期间的研究成果