禽四种细菌病多联菊粉灭活疫苗的研究

摘要

禽多杀性巴氏杆菌病是一种可危害多种禽类的接触性细菌传染病，具有较高的发病率和死亡率。鸡绿脓杆菌病是鸡属条件性致病疾病，在各种不同日龄的鸡群中均会发病，致死率90％以上。此外，鸡白痢和鸡志贺氏菌病也是危害养禽业健康发展的重要疫病。现阶段在国内外，许多禽类细菌病一旦出现发病状态都是很难控制的，且会在短时间内造成很大的经济损失，所以我们要重视禽类细菌病的防治工作。
　　目前临床上对于禽类细菌病多采取抗生素治疗的措施，虽然在一定程度上可杀灭病原菌，但是长期用药带来的耐药性问题越来越严峻，不能忽视。防重于治，对于多数传染病来说，免疫预防是较为理想的控制疾病传播的方式。近年来，随着时代的进步和养殖业的进一步发展深化，禽类疫病的流行呈现了许多新的特点，多种病原菌的混合感染即是其中之一，而多联灭活疫苗由于可同时预防多种疾病且具有较低的成本，因此呈现出了较好的应用前景。
　　为探讨菊粉对四种常见禽细菌病灭活疫苗的佐剂效应，本试验将禽多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡志贺氏菌和鸡绿脓杆菌分别培养至浓度为2×1010cfu/mL，按等比例混合后以终浓度为0.45%甲醛于37℃灭活24小时，分别制备出油乳剂和菊粉佐剂多联灭活疫苗。通过检验，两种疫苗的稳定性和安全性均符合要求。随后进行动物试验以检测两种疫苗的效力，结果显示随着免疫时间的延长，机体针对四种病原菌的血清抗体水平均呈现出逐渐上升的趋势，在两次免疫后第六周各组的抗体水平达到最高值。此时油乳剂疫苗免疫组针对禽多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡志贺氏菌和鸡绿脓杆菌的抗体OD490值分别为0.825、1.015、1.077和1.089，菊粉疫苗免疫组的相应值则为0.913、1.066、1.097和1.302，均略高于油乳剂疫苗免疫组。攻毒试验显示两种多联灭活疫苗均可为实验动物提供超过80%的保护率，具有良好的保护效果。
　　将菊粉佐剂多联灭活疫苗于4℃冰箱内保存3个月和6个月后取出，进行动物试验以检测其免疫效果。结果显示菊粉多联灭活疫苗在保存6个月后仍可诱导免疫鸡产生针对四种病原菌的血清抗体，抗体水平随着免疫时间的增加而增加，两次免疫后在第六周抗体水平达到最高，此时保存3个月后菊粉佐剂疫苗免疫组针对禽多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡志贺氏菌和鸡绿脓杆菌的抗体OD490值最高分别为0.805、0.861、0.834，0.971，保存六个月后这四个值分别0.689、0.789、0.704、0.774，保护率也均在60%以上，结果还显示随着保存时间的延长，菊粉多联灭活疫苗的免疫原性及保护效力均有所降低。根据菊粉的吸收度和溶解度，将菊粉佐剂组分为终浓度10%、20%、30%、40%、50%五组进行试验比较。结果显示，随着免疫时间的延长，机体针对四种病原菌的血清抗体水平均呈现出逐渐上升的趋势。在两次免疫后第6周时各组抗体OD490达到最高值。由数据可以得出，菊粉佐剂加入的最适合浓度对于对禽多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡志贺氏菌和鸡绿脓杆菌的分别为40%、30%、40%和30%，抗体 OD490值的最高值分别为1.164、1.320、1.244、1.276。根据试验结果并结合实际，选取最适的添加浓度为30%。从而为禽类细菌病菊粉多联灭活疫苗的研制提供了一定的参考。

目录

声明

第1章 文献综述

1.1 四种细菌病简介

1.2 常见的免疫疫苗

1.3 多联灭活疫苗概述

1.4 疫苗佐剂

1.5 研究内容与方法

第2章 油乳剂多联灭活疫苗与菊粉多联灭活疫苗的制备

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第3章 油乳剂多联灭活疫苗与菊粉多联灭活疫苗免疫效果

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第4章 菊粉灭活疫苗的保存期和浓度梯度试验

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.3 结果与分析

4.4 讨论

第5章 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间的研究成果