刺葡萄0943 VdWRKY70转录因子抗病功能分析

摘要

白腐菌是葡萄危害较严重的病害之一，因此有关葡萄抗白腐病的研究成为葡萄抗性研究的一个重要的方向。作为世界葡萄属植物起源中心之一，我国拥有很多宝贵的葡萄野生资源，其中一些品种对白腐菌具有抗性，尤其是刺葡萄0943 对白腐菌具有很强的抗性。本课题前期研究发现，中国野生种刺葡萄0943对白腐病抗性很强，且发现VdWRKY49和VdWRKY53转录因子在刺葡萄抗白腐病中具有重要作用。为了进一步研究刺葡萄 0943 抗病品种中与抗性有关的基因，该试验以美人指为对照研究 VdWRKY70 转录因子的抗病功能。本研究的内容和结论如下： 本研究主要取得以下成果： 1、通过刺葡萄0943和美人指接白腐菌表型观察和接菌后不同时期台盼蓝染色观察，发现刺葡萄0943抗白腐能力较强。通过分析刺葡萄0943和美人指中 SA、JA 含量变化与 WRKY70 相关抗病基因 NPR1、PR1 相对表达量的变化趋势，发现 VdNPR1 和 VdPR1 的变化趋势与 SA 含量变化趋势一致，因此推测VdWRKY70主要通过SA途径调控刺葡萄0943抗白腐病功能。 2、通过拟南芥原生质体定位和核定位分析发现，VdWRKY70 具有核定位信号，定位到拟南芥细胞核中。 3、通过转 VdWRKY70 拟南芥苗的培养，用野生型拟南芥作对照，同时接白腐菌、白粉菌和 Pst DC3000，通过接菌一定时间后表型观察、台盼蓝染色、数量性状统计一系列手段，发现转基因拟南芥抗病能力均比野生型拟南芥强。将拟南芥接菌后SA含量的变化与VdWRKY70、AtNPR1、AtPR1相对表达量的变化分析，进一步研究 VdWRKY70 在 SA 途径中的抗病性。结果发现，转基因拟南芥接不同类型菌后 AtNPR1、AtPR1 相对表达量与 SA 含量的变化趋势基本一致。 4、通过聚类分析，发现 VdWRKY70 蛋白序列与 FcWRKY70 ， CaWRKY70，AtWRKY70，AtWRKY54 以及 ClWRKY70 聚在一起,表明它们在功能上也有一定的相似性。 5、用同源克隆的方法获取刺葡萄0943和美人指的启动子序列，通过序列比对和顺式作用元件分析发现，VdPR1 和 VvPR1 启动子序列具有一定的差异，其中 VdPR1 比 VvPR1 多 26bp，且有 SA 途径相关顺式作用元件，因此推测VdWRKY70转录因子在SA途径中可能与VdPR1启动子相结合发挥作用。

目录

第一个书签之前