基于代谢组学技术的黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子干预热病证候模型的研究

摘要

目的: 在传统中医药理论的指导下，利用代谢组学技术，以热病证候模型的整体代谢网络及其生物标志物的变化为切入点，探讨黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子对2，4-二硝基苯酚诱导热病证候模型干预作用的关联性和差异性。 方法: 运用UPLC-TOF/MS技术平台，对黄芩黄柏和黄芩黄柏栀子体外成分与入血成分进行分析，并以复制的热病证候模型动物为研究载体，利用黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子进行干预，借助UPLC-TOF/MS分析手段，对其给药干预前后的尿样进行检测，用MassLynx V4.1软件对数据进行处理分析，以病症的整体代谢网络及其生物标志物的变化来评价其干预作用。 结果: 1.利用UPLC-TOF/MS对黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子水提物进行体外成分分析及鉴别。黄芩黄柏样品中鉴别出19个化学成分，黄芩黄柏栀子样品鉴别出31个化学成分。 2.结合体外成分分析结果，在ESI+模式下，黄芩黄柏组找到了29个入血成分，原型成分5个，23个代谢产物;黄芩黄柏栀子组找到了34个入血成分，其中原型成分有6个，24个代谢产物。在ESI-模式下，黄芩黄柏组找到了3个原型成分，10个代谢产物;黄芩黄柏栀子组找到了4个原型成分，13个代谢产物。 3.复制2，4-二硝基苯酚诱导的热病证候动物模型，以宏观体征和代谢组学方法来评价模型复制成功;在确定能够表征热病证候的正离子检测模式下46个潜在的生物标志物，鉴定了其中2个生物标志物的结构，对这2个生物标志物进行生物学解析，分别与酪氨酸、色氨酸的代谢相关。 4.利用黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子干预热病证候模型，以宏观体征、体温测量结果及代谢组学方法来评价其干预作用。黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子分别对潜在的生物标志物中的21个、24个有回调趋势，表明栀子的加入，可增强对热病证候模型的干预作用。 结论: 1.根据分析及鉴别结果可以看出，黄芩黄柏体外样品的化学成分为黄酮类与生物碱类成分，而黄芩黄柏栀子体外样品的化学成分包括黄酮类、生物碱类和环烯醚萜类成分，均属于黄芩、黄柏、栀子三味药的主要化学成分。 2.从黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子的入血成分研究结果可以看出，在两给药组中检测到的原型成分较少，多以代谢产物的形式出现。所检测到的原型成分分别为黄芩苷、汉黄芩苷、小檗碱和栀子苷，这四个成分分别为黄柏、黄芩、栀子的代表性化学成分。 3.以黄连解毒汤组方为基础，其中的两个配伍形式（黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子）为研究对象，以复制DNP的热病证候模型动物为载体，运用代谢组学技术和UPLC-TOF/MS分析手段，从代谢物组整体及生物标志物的变化表征了黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子的干预作用。

目录

缩略语表

前言

文献综述

1代谢物组学在中医药中的研究进展

2热病证候模型的研究概述

3黄连解毒汤的研究进展

实验研究

第一章黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子的化学成分研究

第二章黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子的入血成分研究

第三章黄芩黄柏与黄芩黄柏栀子干预2,4-二硝基苯酚诱导热病证候模型的研究

第一节热病证候模型的建立及基于代谢组学的评价方法

第二节黄芩黄柏和黄芩黄柏栀子干预热病证候模型的代谢组学研究及比较研究

综合结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

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