ILK信号通路对UUO大鼠肾间质纤维化的调控机制及真武汤的治疗研究

摘要

目的： 1．采用单侧输尿管结扎(UUO)方法复制大鼠肾间质纤维化模型，以尿毒清颗粒为对照，动态观察真武汤对UUO模型大鼠肾功、肾脏形态的变化以及肾小管损害和肾间质纤维化的程度。 2．动态观察UUO模型大鼠纤维连接蛋白(FN)、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)和整合素链激酶(ILK)蛋白表达情况，探讨其与大鼠肾间质纤维化的关系。 3．探讨真武汤拮抗大鼠肾间质纤维化的作用机制，以期有助于临床。 方法： 将150只SPF级健康雄性wistar大鼠，体重(180-200)g，随机分为假手术组和造模组，其中假手术组21只，造模组129只；造模组大鼠分为五组，即为模型组、真武汤低剂量组、中剂量组、高剂量组和尿毒清对照组；采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾间质纤维化模型，假手术组仅切开腹腔并游离左侧输尿管，不做输尿管结扎，从术后第一天开始给药，每天灌服一次，分别连续灌服2周、3周和4周；假手术组和模型组灌服Sml蒸馏水，真武汤低剂量组灌服Sml真武汤低剂量水煎液(0.28g／ml)，中剂量组灌服Sml中剂量水煎液(0.56g/ml)，高剂量组灌服Sml高剂量水煎液(1.12g／ml)．尿毒清对照组灌服5ml尿毒清药液(0.15g/ml)；分别在术后2周、3周和4周前一天将大鼠至于代谢笼收集尿液检测24h尿蛋白定量；大鼠股动脉取血，分离血清，分为两份，一份用于检测血清中肌酐、尿素氮的含量，另一份采用ELISA法检测Ang-Ⅱ和ILK蛋白表达情况；取结扎侧肾组织放于10%甲醛中固定，石蜡固定，采用HE染色的方法检测肾脏形态学的改变以及肾小管损害程度和肾间质纤维化程度的评定，采用免疫组织化学的方法检测肾组织中FN和MMP-9的蛋白表达。 结果： 1．真武汤对UUO大鼠的保护作用。各组大鼠24h尿蛋白定量结果显示没有统计学意义(P＞0.05)；真武汤各剂量组能够降低UUO模型大鼠的肌酐、尿素氮具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，中剂量组最佳，与尿毒清对照组相当。 2．真武汤对UUO大鼠肾脏组织形态及FN和MMP-9蛋白表达。真武汤减轻了UUO模型大鼠的病理损伤，减轻了肾小管损害和肾间质纤维化的程度，抑制了肾组织中FN和MMP-9蛋白表达，具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)尿毒清对照组与中剂量组相当。 3．真武汤对UUO大鼠Ang-Ⅱ和ILK信号通路蛋白的表达。真武汤能够降低UUO模型大鼠血清中Ang-Ⅱ和ILK蛋白含量，具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，真武汤中剂量组Ang-Ⅱ和ILK蛋白的含量最低，与尿毒清对照组的含量相当。 结论： 1．真武汤对UUO模型大鼠有保护作用，能够降低血清中肌酐、尿素氮的含量。 2．真武汤能够减轻UUO模型大鼠的肾脏病理损害，降低肾小管的损害，抗肾间质纤维化。 3．真武汤抑制了UUO模型大鼠血清中Ang-II和ILK蛋白以及肾组织中FN和MMP-9蛋白的表达，抑制了肾间质纤维化的进展。 4．真武汤通过下调Ang-Ⅱ的蛋白表达，从而抑制ILK的蛋白表达，继而降低FN和MMP-9的蛋白含量，从而影响该信号通路的传导，减缓肾间质纤维化的发展，推测其可能为真武汤防治肾间质纤维化的作用机制。 5．真武汤低、中、高剂量组和尿毒清对照组均能在一定程度上保护肾功能，降低肾小管损害程度和肾间质纤维化程度，真武汤中剂量效果最佳，可为临床治疗肾间质纤维化提供依据。

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