电项针对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡和自噬相关蛋白表达的影响

摘要

目的:探讨密波和疏波两种波型电项针对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡和自噬相关蛋白表达的影响及作用机制，优化血管性痴呆的电项针治疗方案，为电项针临床应用提供实验依据。
　　方法:82只健康雄性SD大鼠，随机分为假手术组16只和造模组66只，造模组采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备VD大鼠模型，假手术组仅暴露四条血管，不进行血管阻断。将模型制备成功的48只大鼠随机分为模型组、电项针密波组（密波组）和电项针疏波组（疏波组），加上假手术组，共4组，每组16只大鼠。造模后第8天，开始治疗。密波组和疏波组分别给予密波(50Hz)和疏波(2Hz)电针双侧风池穴和供血穴进行治疗，电针持续刺激30min，每天1次，连续治疗14天。假手术组和模型组给予同等条件抓捕、捆绑、固定，但不予任何治疗。治疗结束后，Y迷宫实验检测大鼠的行为学变化;HE染色观察大鼠海马组织形态结构变化;TUNEL检测大鼠海马神经元凋亡情况;透射电镜观察大鼠海马神经元自噬情况;Western blot检测大鼠海马组织Bcl-2、Bax、LC3、Beclin1、p62、PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。
　　结果:1.Y迷宫检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠自主交替率明显降低(P＜0.01)，新异臂停留时间明显减少(P＜0.01);与模型组比较，密波组与疏波组大鼠自主交替率明显升高(P＜0.05，P＜0.01)，新异臂停留时间明显延长(P＜0.01);与密波组比较，疏波组自主交替率明显升高(P＜0.05)，新异臂停留时间无显著性差异(P＞0.05)。各组大鼠新异臂时间比与随机概率33.33％比较，密波组新异臂停留时间延长，但无显著性差异(P＞0.05)，疏波组新异臂停留时间明显延长(P＜0.05)。
　　2.HE染色结果:模型组大鼠海马组织神经元层次较差，形态不规则，排列疏松紊乱，细胞间质水肿，细胞核固缩深染，神经元与周围组织间隙增大变宽，神经元丢失明显;密波组和疏波组大鼠海马组织神经元结构相对完整，排列比较均匀，细胞间质水肿明显减轻，细胞核固缩减少，深染程度降低，神经元与周围组织间隙变小，神经元少量丢失。
　　3.TUNEL检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马神经元凋亡数目明显增加，凋亡指数明显升高（P＜0.01）;与模型组比较，密波组和疏波组大鼠海马神经元凋亡数目明显减少，凋亡指数明显降低(P＜0.01);与密波组比较，疏波组大鼠海马神经元凋亡数目明显减少，凋亡指数明显降低(P＜0.05)。
　　4.Western blot检测凋亡相关蛋白结果:与假手术组比较，模型组Bcl-2蛋白表达明显减少，Bax蛋白表达明显增加，Bcl-2与Bax比值明显降低（P＜0.01）。与模型组比较，密波组和疏波组Bcl-2蛋白表达明显增加，Bax蛋白表达明显减少，Bcl-2与Bax比值明显升高(P＜0.01)。与密波组比较，疏波组Bcl-2蛋白表达明显增加，Bax蛋白表达明显减少，Bcl-2与Bax比值明显升高(P＜0.01)。
　　5.透射电镜结果:模型组大鼠海马神经元出现许多双层膜性结构，包裹胞浆和线粒体等细胞器，形成自噬体。密波组和疏波组大鼠海马神经元可见少量自噬体。
　　6.Western blot检测自噬相关蛋白结果:与假手术组比较，模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高，Beclin1蛋白表达均明显增加，p62蛋白表达明显减少（P＜0.01）。与模型组比较，密波组和疏波组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显降低，Beelin1蛋白表达明显减少，p62蛋白表达明显增加(P＜0.01)。与密波组比较，疏波组LC3-Ⅱ/L C3-Ⅰ比值明显降低，p62蛋白表达明显增加(P＜0.01)。
　　7.Western blot检测PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白结果:与假手术组比较，模型组PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表达明显增加(P＜0.01)。与模型组比较，密波组与疏波组PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表达明显增加（P＜0.01）。与密波组比较，疏波组PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表达明显增加（P＜0.01）。
　　结论:1.电项针可提高VD大鼠的空间记忆能力，且疏波优于密波。
　　2.电项针可减轻VD大鼠海马神经元损伤，起到神经保护作用，且疏波优于密波。
　　3.电项针可增加VD大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达，减少Bax蛋白表达，升高Bcl-2/Bax比值，降低神经元凋亡指数，起到抑制神经元凋亡作用，且疏波优于密波。
　　4.电项针可降低VD大鼠海马组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值，减少Beclin1蛋白表达，增加p62蛋白表达，起到抑制神经元过度自噬作用，且疏波优于密波。
　　5.电项针可能通过上调VD大鼠海马组织PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达，增强PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性，调节VD大鼠海马神经元凋亡和自噬，减轻神经元损伤，从而改善VD大鼠的认知功能，且疏波优于密波。

目录

缩略词表

摘要

前言

文献综述

1．祖国医学对血管性痴呆的认识

1．1 病名与病位

1．2 病因病机

2．现代医学对血管性痴呆的研究进展

2．1 病因

2．2 危险因素

2．3 发病机制

3．针灸治疗血管性痴呆的研究进展

3．1 针灸治疗血管性痴呆的临床研究

3．2 针灸治疗血管性痴呆的实验研究

材料与方法

1．实验材料

1．1 实验动物

1．2 实验针具

1．3 实验主要试剂

1．4 实验主要仪器

2．实验方法

2．1 血管性痴呆动物模型的制备与分组

2．2 治疗方法

2．3 一般状态的评估

2．4 Y迷宫行为学测试

2．5 实验取材

2．6 相关指标的检测

3．统计学方法

实验结果

1．电项针对VD大鼠一般状态的影响

2．电项针对VD大鼠行为学的影响

2．1 Y迷宫自主交替实验结果

2．2 Y迷宫新奇事物探索实验结果

3．电项针对VD大鼠海马组织形态结构的影响

4．电项针对VD大鼠海马神经元凋亡的影响

4．1 电项针对VD大鼠海马神经元凋亡指数的影响

4．2 电项针对VD大鼠海马组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

5．电项针对VD大鼠海马神经元自噬的影响

5．2 电项针对VD大鼠海马组织LC3、Beclin 1、p62蛋白表达的影响

6．电项针对VD大鼠海马组织PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达的影响

讨论

1．血管性痴呆动物模型的选择

1．1 实验动物的选择

1．2 造模方法的选择

2．针刺方案的选择

2．1 腧穴的主治作用

2．2 腧穴解剖学基础

2．3 电项针的作用机制

2．4 电针参数的选择

3．电项针对VD大鼠空间记忆能力的影响

4．电项针对VD大鼠海马组织形态结构的影响

5．电项针对VD大鼠海马神经元凋亡的影响

6．电项针对VD大鼠海马神经元自噬的影响

7．电项针对VD大鼠海马组织PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达的影响

8．问题与展望

结论

致谢

参考文献

攻读博士学位期间发表的论文

声明

个人简历