有氧运动联合柚皮素在多发性硬化症中的作用研究

摘要

目的：
　　探讨不同强度的有氧运动联合柚皮素对多发性硬化症（multiple scloresis，MS）的实验动物模型自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的影响及作用机制。
　　方法：
　　将144只6-8周雌性C57BL/6J小鼠随机分成不运动对照组（Con）、中等强度运动组（ME）、大强度运动组（HE）、中等强度运动+柚皮素组（ME-Nar）、大强度运动+柚皮素组（HE-Nar）、柚皮素组（Nar）。中等强度运动组克服自身重力（ME）、大强度运动组负重自身体重4%（HE）进行游泳训练；柚皮素组（Nar）使用柚皮素（10mg/kg体重）灌胃给药；中等强度运动+柚皮素组（ME-Nar）、大强度运动+柚皮素组（HE-Nar）给予游泳结合柚皮素。在C57BL/6小鼠进行不同强度的有氧游泳后，多点皮下注射肽MOG35-55联合完全弗氏佐剂（CFA）诱导EAE动物模型，从免疫第0天开始，每周运动6天，并每天上午观察记录小鼠的体重并进行临床打分。在实验的第14天或30天取材，采用流式细胞术检测中枢神经系统中炎症细胞浸润的情况：分离小鼠脾脏、大脑和脊髓、外周及腹股沟淋巴结，应用流式细胞术检测CD4+T细胞亚群、Th细胞亚群以及ELISA检测炎症细胞因子和神经保护因子BDNF的变化。
　　结果：
　　1．临床打分：中等强度运动组与对照组相比，无显著性差异（P＞0.05）；大强度运动组与对照组相比，显著改善EAE小鼠的临床症状（P＜0.05）；柚皮素组与EAE对照组存在显著差异（P＜0.05）；双因素干预组（其中包含中等运动强度+柚皮素组、大运动强度+柚皮素组）与对照组存在显著差异（P＜0.05）；中等强度运动组与大强度运动组存在显著差异（P＜0.05）；中等运动强度+柚皮素组与大运动强度+柚皮素组存在显著差异（P＜0.05）；大强度有氧运动联合柚皮素协同改善EAE的临床评分（与Nar和大强度相比）。
　　2.与对照组或柚皮素组相比，大强度有氧运动减少EAE小鼠中枢神经系统中炎症细胞的浸润和促炎症因子IL-17A、IFN-γ和IL-1β的产生，而相反增加抗炎症因子IL-10和TGF-β的表达，但不影响BDNF和IL-6产生，而该作用能够被柚皮素的干预所增强；但中等强度游泳运动并不能减少中枢神经系统中炎症细胞及炎症因子的表达而影响EAE的发生和发展，但其作用并没有被柚皮素所改变。
　　3.与对照组相比，大强度有氧运动可以调控EAE小鼠中枢神经系统中促炎症Th1和Th17细胞和抗炎症Treg细胞的平衡而缓解EAE的发生发展，这一抑制Th1和Th17的作用可以被柚皮素的干预进一步加强，但并没有进一步影响Treg细胞；而中等强度有氧运动并没有改变EAE小鼠CNS中Th细胞亚群的平衡，且与柚皮素联合并不能协同改变Th细胞亚群平衡。
　　4.与对照组相比，大强度有氧运动可以减少脾细胞中naiveT（Tn）细胞的数量，而增加效应记忆性T细胞（Tem）的数量，但不影响中央记忆性T细胞（Tcm）的数量；而中等强度有氧运动、柚皮素干预以及联合都不改变Tn、Tem和Tcm的数量；
　　5.与对照组相比，柚皮素及大强度有氧运动都抑制外周免疫器官脾脏中Th1和Th17细胞的数量，而仅大强度有氧运动增加Treg细胞的数量；但中等强度有氧运动并不影响Th细胞亚群的平衡；柚皮素联合大强度有氧运动进一步抑制促炎症Th1和Th17的数量，但不仅以增加Treg细胞。
　　结论：
　　1.大强度有氧运动联合柚皮素缓解EAE小鼠的临床症状及病情发展，减轻EAE对实验鼠脑部和脊髓的病理性改变，且优于单纯的大强度有氧运动及柚皮素治疗。
　　2.大强度有氧运动联合柚皮素能够有效抑制EAE小鼠促炎性细胞因子IL-6、IL-17A、IL-1β、IFN-γ和增加抗炎症细胞因子IL-10和TGF-β的产生，且效果优于单纯的大强度有氧运动及柚皮素单独干预组。
　　3.大强度有氧运动联合柚皮素能够有效地抑制促炎症Th1和Th17细胞的数量而缓解EAE的临床症状，且效果优于单纯的大强度有氧运动及柚皮素单独干预。

目录

1绪 论

1.1研究背景

1.2研究目的与意义

1.3文献综述

2实验设计

2.1实验材料

2.2 实验方法

2.3指标测试与方法

2.4细胞表面染色程序

2.5 数据统计

3实验结果

3.1各组实验鼠基本情况

3.2 各组实验鼠的临床评分

3.3不同强度有氧运动联合柚皮素对中枢神经系统中炎症细胞及炎症因子的影响

3.4不同强度的有氧运动对脊髓中的炎症因子及神经保护因子（BDNF）的影响

3.5不同强度的有氧运动对大脑中的细胞因子的影响

3.6不同强度的有氧运动对腹股沟淋巴结中不同阶段的CD4+T细胞亚群的影响

4分析与结论

4.1分析

4.2结论

参考文献

附录

致谢

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