氟伐他汀对高糖环境中肾小球系膜细胞胞外信号调节激酶表达影响的干预研究

摘要

目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病常见和严重的慢性微血管并发症，它已成为终末期肾功能衰竭(end-stagerenalfailure，ESRF)的主要原因之一，因而探索糖尿病肾病的发病机制及其防治方法是当今肾病学者热切关注的课题。近年研究发现糖尿病状态下，糖代谢异常、肾脏血流动力学改变以及各种细胞因子的作用均可引起肾脏细胞内信号转导通路发生改变，在一定程度上导致和加速了DN的发生、发展。丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase，MAPK)是广泛存在于真核细胞内的一类是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是将细胞外有关信号传导到细胞核内部而引起多种细胞反应的主要传递者，主要包括四条传导通路，即胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignalregulatedproteinkinase，ERK)通路，c-jun氨基末端激酶(c-junN-terminalkinase,JNK)通路，P38通路即ERK5通路。在不同胞外刺激下，相应的MAPK通路被激活，从而使细胞对各种各样的胞外刺激作出反应，其中ERK通路是经典的MAPK通路，通常介导激素和生长因子引起的细胞反应，即激素和生长因子通过Ras依赖的信号通路激活ERK，然后磷酸化转录因子，促进c-fos和其他生长反应基因的表达，最后引起细胞的增殖和分化。 血脂代谢紊乱常伴随糖尿病一起发生，高血脂可作为独立危险因素引起肾脏损害。HMG-CoA还原酶抑制剂(hydroxy-methyl-glutarylcoenzymeAreducaseinhibitor,HRI)，又称他汀类药物，是目前临床应用最为广泛和有效的降脂药物，在糖尿病动物模型和临床试验研究中均发现其具有肾脏保护作用，晚近研究提示这种保护作用不完全依赖于HRI的降脂特性，但对其具体作用机制尚不完全清楚。 本课题应用高糖刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞，在除外高脂血症这个影响因素的条件下，从细胞与分子水平观察系膜细胞中ERK活性的变化，并给予HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀(fluvastatin)进行干预，探讨ERK信号转导途径在DN发生发展中的作用以及氟伐他汀可能的肾脏保护作用机制，为阐明DN的发病机制及寻找防治方法提供实验性理论依据。 结果：1.细胞培养结果：倒置相差显微镜下可见MC呈梭形、不规则星形或三角形的、树枝形，当细胞密集时可重叠生长，胞浆多突起，有大量微丝样结构，核居中央，多呈圆形或椭圆形；免疫细胞化学显示胞浆结蛋白阳性，角蛋白、Ⅷ因子阴性；2.westernblot结果显示：12h时，HG组pERK1/2蛋白的表达量已较NG组明显增高，随培养时间延长其表达呈上升趋势(p＜0.01)，氟伐他汀干预组较同时期高糖组降低明显，差异有显著性(P＜0.01)；3.RT-PCR结果表明HG组TGF-β1mRNA水平在12h时已较正常组有所升高(P＜0.01)，随高糖干预时间的延长，TGF-β1mRNA升高更为显著(P＜0.01)，且呈递增趋势，72h时表达量最多(p＜0.01)，而HG+Flu组较同时相点HG组明显降低(P＜0.01)。4.放免法结果：12h、24h时三组细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量无明显差异(p＞0.05)，48h时HG组较NG组增高(p＜0.05)，72h时增高更为明显(P＜0.01)，而HG+Flu组与同时期HG组相比其表达降低，差异有显著性(p＜0.01)。 结论：高糖环境下培养的系膜细胞中pERK1/2的表达上调，TGF-β1mRNA、Ⅳ型胶原合成增多，提示系膜细胞ERK信号转导通路激活可能参与了糖尿病肾损害的发生、发展过程；高糖状态下，TGF-β1mRNA表达升高，细胞外基质进行性积聚等肾脏病理改变可能与肾脏细胞内ERK信号转导通路激活有关。氟伐他汀可抑制高糖刺激下系膜细胞中ERK通路的活化，进而下调TGF-β1mRNA，抑制Ⅳ型胶原的合成与分泌，提示氟伐他汀对肾脏的直接保护作用机制可能部分通过抑制系膜细胞内ERK通路的激活而完成，该作用不依赖于其降低血脂的效应。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 糖尿病肾病系膜细胞中葡萄糖依赖的信号转导途径

致谢

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