枸杞、黄芪对大鼠睾丸支持细胞功能的作用探讨

摘要

目的：支持细胞(Sertolicell)是睾丸中一种有重要功能的细胞，除了对生精细胞起支持和营养作用外，Sertoli细胞还分泌雄激素结合蛋白(ABP)、抑制素(INH)、激活素(ACT)等多种因子，形成并维持有利于精子发生的微环境。越来越多的研究表明，Sertoli细胞分泌的抑制素B(INHB)是目前评价精子发生最好的内分泌标志物。枸杞、黄芪是我国传统的名贵中药材，长期以来一直被祖国医药用作补肾益气的药物，具有保护睾丸功能的作用，用于治疗和改善男性生殖功能。枸杞与黄芪对生殖功能的影响目前有一定的报道，但仅限于组织形态学方面的研究。因此我们希望将睾丸Sertoli细胞的功能与枸杞、黄芪二者的研究联合起来，从细胞和分子水平研究中药对生精功能的作用，为研究男性生殖功能调控寻找一个新思路。本研究拟将大鼠睾丸Sertoli细胞进行体外分离培养，用免疫组织化学及RT-PCR等方法检测Sertoli细胞分泌的与生精功能相关的激素—INH的表达情况，观察枸杞多糖、黄芪提取液及两药联合使用(组成杞芪合剂)对Sertoli细胞的增殖与合成INH功能的影响，为研究生精功能的调控及其机理提供基础实验依据。 方法：本研究分两部分: 1.大鼠睾丸Sertoli细胞的培养、鉴定与INH的表达取18-22日SD大鼠睾丸组织，采用改良的两步酶消化法分离睾丸Sertoli细胞，将获得的Sertoli细胞加入DMEM/F12培养液(含20％新生牛血清)置于37℃、5％CO2条件下进行培养，用MTT法描记Sertoli细胞的生长曲线，利用Sertoli细胞的特异性标志物Fas-L，采用免疫组织化学方法对纯化的Sertoli细胞进行鉴定，同时用免疫组织化学方法检测Sertoli细胞中INHα亚基(INHα)、βA亚基(INHβA)、βB亚基(INHβB)的表达情况。 2.枸杞、黄芪对大鼠睾丸Sertoli细胞功能的影响本组研究分三小部分 2.1枸杞、黄芪对睾丸Sertoli细胞增殖的影响分别用枸杞、黄芪、杞芪合剂三组药物处理体外培养的大鼠睾丸Sertoli细胞，同时以体外正常培养的Sertoli细胞作为对照，用MTT法观察上述药物处理对睾丸Sertoli细胞增殖的影响。 2.2枸杞、黄芪对睾丸Sertoli细胞INHβB合成的影响用枸杞、黄芪、杞芪合剂三组药物处理体外培养的Sertoli细胞，同时以体外正常培养的Sertoli细胞作为对照，用免疫组织化学方法观察药物处理对正常状态及过氧化物损害状态下Sertoli细胞INHβB合成的影响。 2.3枸杞、黄芪对Sertoli细胞INHβBmRNA水平的影响用总RNA提取试剂盒提取体外培养的Sertoli细胞总RNA，采用一步法RT-PCR检测INHβBmRNA片段，同时反转录并扩增GAPDHmRNA片段作为内参照，观察枸杞、黄芪、杞芪合剂三组药物对正常状态及过氧化物损害状态下Sertoli细胞INHβBmRNA水平的影响，进而反映Sertoli细胞的功能状态。 结论:本实验在体外成功地培养了大鼠睾丸Sertoli细胞，通过MTT分析法、免疫组织化学法与一步法RT-PCR等实验我们发现： 1.经免疫组织化学染色Sertoli细胞中INHα、INHβA、INHβB均为阳性表达，证明Sertoli细胞的确可以分泌INH，Sertoli细胞是INH的主要来源。 2.枸杞、黄芪与杞芪合剂处理体外培养的Sertoli细胞后，在一定程度上可以促进Sertoli细胞的增殖，而杞芪合剂与枸杞、黄芪三药的促增殖作用相比较，并没有明显的差异。 3.枸杞、黄芪对体外培养的Sertoli细胞中INHβB的转录与合成水平均有明显的上调作用，枸杞与黄芪联合用药的效果优于单用枸杞和黄芪。 4.枸杞、黄芪对过氧化物损伤的Sertoli细胞中INHβB的转录与合成水平均有一定的保护作用，枸杞与黄芪联合用药的效果优于单用枸杞或黄芪的效果。

目录

摘要

引言

第一部分大鼠睾丸支持细胞的原代培养、鉴定与抑制素的表达

第二部分枸杞、黄芪对体外培养的大鼠睾丸支持细胞功能的影响

结论

综述睾丸支持细胞与生精功能障碍的关系

致谢

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