血管紧张素Ⅱ对人近端肾小管上皮细胞血管内皮生长因子及其可溶性受体表达及增殖的影响

摘要

目的: 肾间质纤维化是各种原因引起的慢性肾脏病变最后的共同结局，最终导致终末期肾功能衰竭。大量的研究表明，肾内肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)在肾脏纤维化发生中起着十分关键的作用。肾小管上皮细胞局部可产生血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)可促使小管上皮细胞表达各种致炎因子及细胞生长因子，引起小管上皮细胞肥大，增加细胞外基质(extracellular matrix，ECM)过度沉积和降解减少，诱导肾小管上皮细胞发生表型转化，从而加速小管间质纤维化的进展。血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowthfactor，VEGF)是一种特异性的促进血管内皮生长及渗透的因子，具有增加血管通透性，促进内皮细胞增殖及血管维持功能。它在肾脏的发育，生理功能的维持，系膜，内皮的增生，蛋白尿的发生，炎症及损伤修复以及在肾间质纤维化中具有重要的作用。体内及体外试验已证明Ang Ⅱ能够刺激VEGF在肾脏中表达。目前已知的内生性VEGF选择性抑制剂是可溶性VEGF受体(sFlt-1)，是一种肝磷脂凝结蛋白，sFlt-1与VEGF具有高亲和力，抑制VEGF的促有丝分裂作用。sFlt-1和KDR/FIK-1基因仅表达于血管内皮细胞，在由VEGF介导的血管形成过程中发挥选择性和内生性抑制作用。糖尿病肾病患者于早期尿中VEGF和sFlt-1排泄增加，给予VEGF抗体后，肾小球肥大减轻，蛋白尿明显减少，肾脏损伤进展延缓。然而，Ang Ⅱ对人近端肾小管上皮细胞VEGF及其可溶性受体SFLT-1的表达有何影响?是否能增加其表达，从而促进肾小管间质纤维化的进展?检索国内外文献相关报道极少。本课题利用体外培养的人近端肾小管上皮细胞，研究AngⅡ对肾小管上皮细胞VEGF及sFlt-1的表达及增殖的影响，并与高糖刺激做比较，以探讨Ang Ⅱ在肾间质纤维化中的作用及可能的发病机制。 方法: 1、人近端肾小管上皮细胞(HK-2)的培养：HK-2购自中国协和医科大学细胞中心，常规培养。 2、实验分组：空白对照组及不同浓度AngⅡ组(10，1nmol/L)和高糖组(25mmol/L)。观察不同时间点：6h、24h、48h。 3、应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察AngⅡ及高糖(25mmol/L)对HK-2 VEGF及sFlt-1 mRNA表达的影响；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度的AngⅡ对HK-2增殖的影响。 4、本实验计量资料用x±s表示，使用SPSS13.0统计软件进行统计描述。 结果: 1、RT-PCR结果显示不同浓度Ang Ⅱ对HK-2VEGFmRNA表达的影响：加入AngⅡ1nmol/L 6h、24h、48h后，VEGF mRNA的表达量为对照组的1.721、1.590、1.000倍(P<0.01)；加入10nmol/L AngⅡ后，VEGFmRNA的表达量分别为对照组的1.721、2.033、1.576倍(P<0.01)。 2、不同AngⅡ对sFlt-1 mRNA表达的影响：加入AngⅡ1nmol/L后，sFlt-1mRNA的表达量分别为的2.533、2.517、1.867倍(P<0.05)。加入AngⅡ10nmol/后，sFlt-1 mRNA的表达量分别为对照组的3.167、3.034、2.500倍(P<0.05)。 3、高糖环境下VEGF mRNA的表达量分别为1.525、1.295、1.322倍(P<0.05)；sFlt-1 mRNA的表达量分别为对照组的0.767、0.7333、0.900倍，与对照组相比有下降趋势。 4、而MTT结果均显示AngⅡ促进HK-2的增殖(与对照组比较，P<0.01)，随着Ang Ⅱ浓度的升高及作用时间的延长，表现出剂量和时间依赖性的趋势。 结论: 1、体外培养的人近端肾小管上皮细胞在正常培养条件下有VEGF及sFLT-1的表达。 2、AngⅡ促进人近端肾小管上皮细胞VEGF及其受体sFLT-1的表达增高，随着浓度及时间的增加，呈上升趋势。 3、Ang Ⅱ可以促进人近端肾小管上皮细胞增殖，随着浓度及时间的增加，呈上升趋势。 4、高糖环境下人近端肾小管上皮细胞VEGF表达明显增高，对sFLT-1无明显影响。 本研究提示：AngⅡ可能通过与高糖不尽相同的途径来促进VEGF及sFLT-1的表达，干预VEGF及sFLT-1可能会延缓慢性肾衰的进展，为临床治疗提供新的思路。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图附表

讨论

结论

参考文献

综述血管内皮生长因子与肾脏疾病

致谢

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