cMPDs患者JAK2 V617F点突变和ETS2 mRNA表达及其相关性的研究

摘要

目的：真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和特发性骨髓纤维化(IMF)组成了经典的BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病(cMPDs)。与BCR/ABL阳性的CML不同，在PV、ET和IMF患者没有发现可重复性染色体易位，也无特效治疗药物。近期的一些研究发现BCR/ABL阴性的cMPDs患者中广泛存在一种特异性基因突变：JAK2基因的第1849位点发生G→T突变，导致JAK2蛋白第617位的缬氨酸被苯丙氨酸代替(简称为JAK2 V617F)。约90％的PV患者存在该突变，并且在其他BCR/ABL阴性的cMPDs患者如ET和IMF中也有相当的比例，而在其他血液病中罕见此突变。ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)是ETS转录因子家族的一员，ETS2基因定位于21号染色体21q22.3，编码分子量为56-kDa的蛋白质，它在肿瘤发生、骨骼发育和免疫应答中扮演重要角色。近期有研究表明在BCR/ABL阴性的cMPDs中，JAK2 V617F点突变阳性患者的ETS2 mRNA表达水平高于阴性者。本研究旨在探讨BCR/ABL阴性的cMPDs中JAK2 V617F点突变的发生率、ETS2 mRNA表达情况及其与cMPDs分类、疗效、并发症发生率及预后之间的关系。通过JAK2 V617F突变率与ETS2mRNA表达情况的相关性研究，了解JAK2 V617F点突变与ETS2 mRNA表达水平的异常在cMPDs发生发展中的作用机制，期望为寻找针对性治疗方法奠定基础。 方法： 1 本实验研究对象包括62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者[26例PV、26例ET、9例IMF、1例慢性中性粒细胞性白血病(CNL)]；20例慢性粒细胞性白血病(CML)患者、10例急性白血病(AL)患者，15名健康志愿者。62例cMPDs患者为研究组、其他患者和正常人为对照组。所有病例符合WHO诊断标准。 2 从各组患者及健康志愿者的骨髓或血液中提取单个核细胞，再从其中提取总RNA及DNA。 3 用半定量逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组ETS2 mRNA的表达水平。 4 用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)筛选各组JAK2V617F点突变，根据检查结果将62例cMPDs患者分为突变阳性组及阴性组。全部阳性标本和随机抽取的部分阴性对照标本，经PCR、产物纯化后，进行基因测序以验证突变结果。 5 分别观察和比较各组病例的临床特征，包括：性别、发病年龄、临床症状及体征、血象、骨髓像、并发症、疗效和预后等。 6 统计学处理：采用单因素方差分析比较ETS2 mRNA在MPD组、急性白血病组、慢性粒细胞白血病组与正常对照组中的表达水平有无差异；卡方检验分析JAK2 V617F点突变率在各组的差异。ETS2 mRNA表达水平在cMPDs JAK2V617F点突变阳性组与阴性组比用t检验。所有数据用SPSS11.0统计软件分析处理。 结果： 1 62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者中，共有44例患者检测到JAK2 V617F点突变，包括23/26(88.46％)例PV，15/26(57.69％)例ET，5/9(55.56％)例IMF。1/1(100.00％)例CNL。在CML、AL及健康志愿者中未检测到JAK2 V617F点突变。 2 ETS2 mRNA表达水平在cMPDs组(平均值0.2876，阳性率81.96％)、CML组(平均值0.4133，阳性率85.0％)和AL(平均值0.5320，阳性率80.0％)组均显著高于健康志愿者(平均值0.106，阳性率46.7％)。cMPDs组、CML组、AL组之间比较，ETS2 mRNA表达水平均值无明显差别。 3 在cMPDs组JAK2 V617F点突变阳性的病例中ETS2mRNA表达水平(平均值0.323，阳性率86.0％)明显高于突变阴性病例(平均值0.203，阳性率72.2％)，差别有显著意义，P=0.022。 4 临床特征对比：PV患者中JAK2 V617F点突变阳性组的外周血白细胞计数显著高于阴性组(平均值18.2×10<'9>/L vs7.6×10<'9>/L，P=0.035)，血小板计数显著高于阴性组(平均值479×10<'9>/L vs 277×10<'9>/L，P=0.025)。ET患者中JAK2 V617F点突变阳性组的血红蛋白显著高于阴性组(平均值146g/L vs122g/L，P=0.001)，白细胞计数显著高于阴性组(平均值14.6×10<'9>/L vs 10.9×10<'9>/L，P=0.044)。在IMF患者中JAK2V617F点突变阳性组与阴性组之间的临床特征无显著性差异，P>0.05。 结论： 1 大部分cMPDs患者存在JAK2 V617F点突变(PV 88.46％、ET 57.69％、IMF 55.56％)，提示JAK2 V617F点突变所产生的激活作用是PV、ET、IMF的重要发病机制。 2 在JAK2 V617F点突变阳性的cMPDs患者中，ETS2 mRNA的表达水平高于JAK2 V617F点突变阴性的cMPDs患者。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述cMPDs患者中JAK2 V617F点突变的研究进展及其与ETS2mRNA表达的相关性

致谢

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