实时定量聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病融合基因的临床应用

摘要

研究背景：急性早幼粒细胞白血病(APL)的患者中有超过95％存在t(15；17)染色体异常而形成的 PML/RARα融合基因，该融合基因是由于染色体 15q22和17q21的早幼粒细胞白血病(PML) 基因和维甲酸受体α(RARα)基因融合形成的。目前已经证实对该融合基因的检测是APL诊断、治疗、并预测复发最准确的指标。微小残留病一直以来被认为是白血病复发的根源，由于融合基因的存在，使得对APL微小残留病的检测成为可能，实时定量逆转录聚合酶链反应 (RQ-RT-PCR) 是目前最先进最准确对融合基因进行定量检测从而对微小残留病进行精确检测的方法，它的敏感性、准确性、可重复性，使建立一种快速、可准确定量检测融合基因并使之标准化的方法成为可能。 目的：建立一套完整的利用RQ-RF-PCR方法对PML/RARα融合基因进行检测的方法。通过对APL患者PML/RAR α转录本表达水平检测，分析融合基因表达量与临床的关系；对部分患者PML/RAR α转录本的动态检测，以观察不同方法治疗后融合基因表达量的变化，与巢式 PCR结果进行比较，建立了一整套利用 RQ-R17-PCR方法对PML/RARα阳性APL患者的MRD监测和临床分析方法。 方法：建立荧光染料SYBR GreenⅠ和 Eva GreenRQ-PCR技术，分别对融合基因PML/RARα和对照基因GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)进行检测。利用分子克隆的方法建立PML/RARα及GAPDH的质粒标准品，对其10倍系列稀释后确定PCR敏感度：同时检测56例于2004.9-2006．10期间在河北北方学院附属第一医院、北京大学第一医院门诊就诊或住院治疗的APL患者骨髓标本。APL融合基因PML-RARα的表达水平，并且与传统巢式PCR方法进行敏感度比较。选择10例初诊患者随机分为两组，分别给予全反式维甲酸(ATRA)+化疗或ATRA+三氧化二砷治疗。每三周抽取骨髓标本，检测治疗后 PML-RARα表达的变化。分析初诊时患者的融合基因 PML/RARα表达量与临床因素的关系；分析初诊时和随诊时患者的融合基因PML/RAR α表达量与治疗方案的关系。同时与巢式PCR方法结果进行比较。检测结果应用SPSS for Windows 11.5软件包进行统计学处理，采用相关分析及多元线性分析进行统计。 结论： RQ-RT-PCR技术对PML/RAR α融合基因的检测，良好的敏感度，特异性，准确性和可重复性。其 PCR敏感度达到10<'2>拷贝/μl。RQ-RT-PCR技术检测 PML/RARα融合基因与巢式PCR法相比敏感性稍低，适用于对已知曾有阳性的患者进行MRD定量监测，巢式。PCR法可用于初治患者的筛查。初诊时患者的融合基因PML/RARα表达量与临床因素未发现明显的相关性。EVA Green 和 SYBR GreenⅠ都可以用于 RQ-PCR，但是Eva Green更敏感高效。不同治疗方法使APL完全缓解后，PML/RARα融合基因均转阴，RO-RT-PCR与巢式PCR法之间未发现明显差异。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 实时定量聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病融合基因的临床应用

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