辛伐他汀对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及其对炎性细胞因子的影响

摘要

目的：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性进行性自身免疫性疾病，以对称性、侵蚀性关节滑膜炎为主要特征，病变呈持续性、反复发作过程。病情逐步进展，可引起多系统受累并最终导致骨和软骨的破坏及关节功能障碍。RA的病因及发病机制至今尚未完全阐明，但是大量研究证实：多种免疫活性细胞的活化，细胞因子、炎症介质的共同参与，血管翳的形成是造成疾病发生发展的重要原因。目前，对于RA的治疗，国内外尚无理想药物。传统抗风湿药物毒副作用较大，疗效差且疗程长，而生物制剂价格昂贵，还不能被普遍应用。因此，寻找一种新的治疗药物或治疗方法尤为重要。辛伐他汀作为一种常用的有效降低胆固醇药物，除了其明确降低胆固醇的作用之外，还发挥着其它多方面效用，包括抗炎和免疫调节作用等。但国内用其治疗RA 的报道尚罕见。由完全弗氏佐剂所诱导的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型被认为具有与RA相似的关节炎变化，本实验即以佐剂性关节炎大鼠模型为基础，从关节肿胀度、血浆肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)浓度的变化和肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子-1 α(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1 α)在AA大鼠关节滑膜中的表达水平几个方面，观察辛伐他汀对AA的影响，评价其疗效，探讨辛伐他汀与TNF-α、VEGF、HIF-1α三者之间的α相关性及辛伐他汀治疗RA的机制和临床应用价值。 方法：(1) 选用60只成年雄性Wistar大鼠，随机分成6组，每组10只，分别命名为Ⅰ-Ⅵ组，其中Ⅰ组为正常对照组，Ⅱ组为模型对照组，Ⅲ组为辛伐他汀低剂量组，Ⅳ组为辛伐他汀中剂量组，Ⅴ组为辛伐他汀高剂量组，Ⅵ组为甲氨喋呤组。Ⅱ-Ⅵ组每只大鼠给予尾根部皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)0.2ml.制作AA模型。(2) 于造模致炎后第12天开始Ⅲ-V组分别给予辛伐他汀1.8 mg/kg.d、3.6 mg/kg.d、7.2 mg/kg.d灌胃治疗，Ⅵ组给予甲氨喋呤2.7mg/kg.w灌胃治疗。(3) 注射后连续观察大鼠的一般情况及关节炎症表现，用排水法测定不同时间点各组大鼠的右足体积，并进行关节炎指数(AI)评定。(4) 各组大鼠于第28天摘取眼球取血，离心备用，采用双抗体夹心ELISA法测定各组大鼠血浆TNF-α浓度。(5) 采血处死后取大鼠双膝关节滑膜组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，行苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察关节滑膜衬里层细胞(LCC)增生，衬里下层炎细胞浸润及血管翳形成等病理变化。(6) 对大鼠滑膜组织进行TNF-α、VEGF及HIF-1α的SP免疫组织化学染色，采用真彩色病理图像分析系统进行定量分析。(7) 应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。 结果：(1) AI:第Ⅱ组大鼠造模后各时间点的AI均高于第Ⅰ组(P<0.01)，造模后21天开始比第15天显著升高(P<0.05)，但高峰出现在造模后24天；Ⅲ-Ⅵ组造模后21天开始比第15天显著升高(P<0.05)，高峰出现在造模后24天，Ⅴ、Ⅵ组间AI无统计学差异(P>0.05)。(2) 足肿胀体积：第Ⅱ组大鼠造模后15天右足体积高于第Ⅰ组(P<0.05)，第21-24天达到高峰，之后有所下降(P<0.01)。Ⅲ-Ⅵ组于造模第18天右足体积高于第Ⅰ组(P<0.05)，第21-24天达到肿胀高峰。Ⅴ、Ⅵ组于第21-27天明显低于第Ⅱ组(P<0.01)，但两组之间无统计学差异(P>0.05)。(3) 血浆TNF-α浓度：第Ⅱ-Ⅳ组大鼠造模后第28天血浆TNF-α浓度高于第Ⅰ组(P<0.01)，Ⅴ、Ⅵ组大鼠造模后第28天血浆TNF-α浓度与第Ⅰ组无统计学差异(P>0.05)，Ⅴ、Ⅵ组间血浆TNF-α浓度亦无统计学差异(P>0.05)。(4) 滑膜TNF-α、VEGF及HIF-1α的积分光密度(IOD)值、滑膜组织病理积分：造模后第Ⅱ组大鼠均显著高于第Ⅰ组，有统计学差异；第Ⅴ组TNF-α的IOD值在造模后28天明显低于第Ⅱ组，第Ⅳ组VEGF及HIF-1α的IOD值在造模后28天明显低于第Ⅱ组，具有统计学差异。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组的平均病理学评分均低于第Ⅱ组且有统计学意义。(5) 相关性分析：AI与足肿胀体积之间呈直线正相关；血浆TNF-α浓度与足肿胀体积之间呈正相关，滑膜组织TNF-α、VEGF、HIF-1α的IOD值分别与足肿胀体积、病理积分均呈直线正相关，且三者之间分别呈正相关。 结论：(1) 辛伐他汀对AA大鼠有明显的抗炎作用，能够降低AA大鼠的关节炎指数，减轻足肿胀体积。(2) 辛伐他汀能减轻滑膜组织肿胀，减少膝关节滑膜衬里层的增生，提示提示辛伐他汀可能能延缓AA大鼠病程进展。(3) 辛伐他汀高剂量组对AA大鼠的治疗作用优于低、中剂量组，提示辛伐他汀的治疗效果可能存在剂量依赖性。(4) 辛伐他汀能明显降低AA大鼠血浆TNF-α水平和滑膜组织TNF-α、VEGF及HIF-1α表达。(5) 辛伐他汀在抑制AA大鼠的关节炎症、降低血清TNF-α浓度和减少滑膜TNF-α的表达方面与甲氨喋呤无明显差别，但在减少滑膜VEGF及HIF-1α水平不及甲氨喋呤，二者的远期疗效还有待于进一步观察。(6) AI与足体积呈直线正相关，二者均能反映关节肿胀情况，但后者方法更为精确、客观。二者结合能更直观、准确的反映关节肿胀程度。(7) 造模后血浆TNF-α水平和滑膜TNF-α、VEGF、HIF-1α表达明显升高，并均与足体积呈正相关，提示TNF-α、VEGF、HIF-1α三者在RA病理过程中发挥重要作用。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述他汀类药物对自身免疫性疾病作用的研究进展

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