银杏叶提取物及磷酸肌酸钠对Aβ25-35致PC12细胞凋亡保护作用机制研究

摘要

目的：本文通过淀粉样蛋白β(Aβ)25-35诱导PCI2细胞凋亡，建立阿尔茨海默病的细胞膜型，并给予银杏叶提取物(EGB)及磷酸肌酸钠(PCr)进行干预，了解二者是否对Aβ25-35所致的神经元凋亡有保护作用。 方法：取对数生长期PCI2细胞，细胞计数后，以104/mL的密度接种于96孔板中，培养24小时后，半量换液，并加入不同浓度的A 13 25.35(A：0 μmol/L(对照组)、B：10 μmol/L、C：20 μmol/L、D：30 μmol/L、E：40 μmol/L)。培养24小时后测得细胞存活率，应用SPSS软件选择方差分析法进行统计分析，发现在Aβ25-35浓度为30 μmol/L时对PCI2细胞的损伤效果明显。按相同条件进行细胞培养24小时后加入Aβ 25-35，浓度为30 μmol/L，12小时后，按下面分组方法分别加入银杏叶提取物及磷酸肌酸钠：银杏叶提取物A：A βOumol(对照组)、B：Aβ30umol/L、C：Aβ330umol/L+EGB 1 00mg/L、D：Aβ30umol/L+EGB200mg/L、E:Aβ 30umol/L+EGB400mg/L，磷酸肌酸钠组A：A β 0umol/L(对照组)、B：Aβ30umol/L、C：Aβ30umol/L+PCrlommol/L、D：Aβ30umol/L+Cr20mmol/L、E：Aβ 30umol/L+PCr 30 mmol/L。培养12小时后，CCK-8法测细胞存活率，统计分析后得出，银杏叶提取物组200mg/L，磷酸肌酸钠组20mmol/L对细胞保护作用明显。按上述方法用A β 25-35浓度为30μmol/L损伤PCI2细胞，12小时后予银杏叶提取物组(200mg/L)，PCr组(20mmol/L)保护细胞，培养12小时后，用线粒体膜电位特异荧光探针JC-1标记PCI2细胞，启动共聚焦显微镜，选择488nm氩离子激光和543nm氦氖激光作为激发光，选择530±15 nm和615±30 nm通道作为接收通道，启动计算机运行Lasersharp2000软件，扫描图象，最后将图象在Laserpix软件中进行处理。同时将浓度为104/mL的细胞，以600转/分的速度进行细胞甩片后，按TUNEL凋亡试剂盒的操作步骤检测细胞凋亡，计算细胞凋亡率，采集图像。采用SPSS统计软件进行统计学分析。结果：在Aβ25-35浓度为30 μmol/L时，对PCI2细胞损伤效果明显，与0μmol/L，10 μ mol/L，20μmol/L组有显著差异(P＜0.01)，而和40μmol/L组，差异不明显(P＞0.01)。以不同浓度的银杏叶提取物及磷酸肌酸钠进行干预后，测量OD值，采用方差分析法得出EGB200mg/L组与Aβ30umol/L，EGB100mg/L组差异明显(P＜0.01)，而和400mg/L组及Aβ0umol/L组无明显差异(P＞0.01)，PCr 20mmol/L与Aβ30umol/L，PCr10mmol/L组差异明显(P＜0.01)，和PCr 30mmol/L组无明显差异。线粒体膜电位示30umol/L的Aβ处理PCI2细胞(简称为Aβ组，下同)24小时后，红色荧光强度明显降低，绿色荧光强度明显增强，即线粒体膜电位(MMP)降低。而以Aβ30umol/L+EGB200mg/L组处理PCI2细胞(简称为银杏组，下同)及Aβ30umol/L+PCr20mmol/L组同时处理PCI2细胞(简称为磷酸肌酸钠组，下同)后，红色荧光强度明显增强，绿色荧光强度明显降低，即线粒体膜电位(MMP)升高。Aβ组(30umol/LAβ)、EGB组(Aβ330 umol/L+EGB 200mg/L)及PCr组(Aβ30umol/L+PCr 20mmol/L)均可见TUNEL阳性细胞，即凋亡细胞，PO-D标记的凋亡细胞显绿色荧光；而以DAB显色，凋亡细胞核被染成棕色。Aβ组细胞凋亡率(63％)高于银杏组(21％)及磷酸肌酸组(22％)(p＜0.01)。结论：1.浓度为30umol/L的Aβ25-35可诱导PC12细胞凋亡，建立AD的细胞膜型。2.浓度为200mg/L的银杏叶提取物及20mmol/L的磷酸肌酸钠，通过提高PC12细胞的线粒体膜电位水平，抑制细胞凋亡，提高细胞存活率，从而对Aβ25-35损伤的PC12细胞起到一定的保护作用。

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前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述阿尔茨海默病（AD）发病中Aβ的作用机制及AD的治疗进展

致谢

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