解毒活血方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及相关因子影响的实验研究

摘要

目的：冠心病(CHD)是临床常见病、多发病，严重威胁着人们的身体健康。因此，如何防治冠心病是国内外医学专家研究的重点课题之一。 冠心病的病理基础为动脉粥样硬化(AS)。目前，现代医学对AS发病机理的研究涉及脂质浸润、内皮损伤、血栓形成等方面，近年来尤其对氧化应激、炎症学说探讨较多。越来越多的研究资料表明：冠心病与氧化应激、炎症反应密切相关，两者相互作用、相互影响，共同导致了冠心病的发生与发展。热毒学说是中医学对冠心病病机的一种重要认识。该学说认为热毒瘀于脉络，阻滞心脉气血运行，络脉瘀阻，毒瘀互结，而致胸痹心痛。大量研究证实，热毒与氧化应激、炎症反应密切相关。AS过程中所产生的符种细胞因子、脂质过氧化物均属于中医“内生毒邪”的范畴。 目前普遍认为，内皮功能障碍是动脉粥样硬化的关键步骤，它不仅导致AS形成，而且对AS进展及并发症(如血管痉挛、血栓形成)有重要作用。抗AS的关键目标就足保护内皮细胞(EC)免受各种危险因素侵害。而氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作为重要的氧自由基携带者，足内皮损伤的主要机制。 鉴于以上，我们根据胸痹热毒学说确立了解毒活血法，并据此法组成解毒活血方，使其含药血清作用于ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤模型，并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)等指标的变化，从抗氧化、抗炎角度探讨解毒活血法对血管内皮细胞的保护作用，为临床治疗冠心病提供理论和实验依据。 方法： 1.MTT法观察细胞增殖情况：取对数生长期细胞，消化后以2×105cell/ml的密度接利于96孔培养板，待细胞贴壁生长至约80％)后，同步化培养24小时，分为4组：(1)空白对照组：加入20％空白血清+5％新生牛血清培养液(2)病理模型组：加入20％空白血清+100mg/L ox-LDL+5％新生牛血清培养液(3)解毒活血方含药血清低剂量组：加入10％解毒活血方含药血清+10％空白血清+100mg/L ox-LDL+5％新生牛血清培养液(4)解毒活血方含药血清高剂量组：加入20％解毒活血方含约血清+100mg/L ox-LDL+5％新生牛血消培养液。培养24小时后，MTT法观察细胞增殖情况。 2培养上清液SOD、MDA、NO、ET-1、TNF-α含最的测定：取对数生长期细胞，消化后以2×105cell/ml的密度接种于24孔培养板，余步骤同上，分组培养24小时后，测定上清液中SOD、MDA、NO、ET-1、TNF-α含量。 3.免疫组化法测定ICAM-1表达：取对数生长期细胞，消化后以2×104 cell/ml的密度接种于预先放有处理过玻片的6孔培养板中，培养24小时后，同步化培养24小时，实验分组及所加液体同上，24小时后，夹出盖玻片，PBS洗涤2次后放入冷丙酮固定10min，取出干燥后细胞面朝上用中性树脂胶封于载玻片上，免疫组化法测定ICAM-1表达。 结果： 1.MTT法观察细胞增殖情况：解毒活血方含药血消低剂量组(0.78±0.017)、解毒活血方含药血清高剂最组(0.79±0.024)与病理模型组(0.62±0.058)相比，0D值均显著升高(P＜0.01)。 2.培养上清液中超氧化物歧化酶含量：解毒活血方含药血清低剂量组(63.57±1.63)、解毒活血方含药血清高剂量组(67.63±2.95)与病理模型组(58.26±1.34)相比均显著升高(P＜0.01)。 培养上清液中丙二醛含量：解毒活血方含药血清低剂量组(6.87±1.26)、解毒活血方含药血清高剂量组(6.83±0.46)与病理模型组(10.02±1.66)相比均显著降低 (P＜0.01)。 3.培养上清液中一氧化氮含量：解毒活血方含药血清低剂量组(1.86±0.19)与病理模型组(2.34±0.18)相比显著降低(P＜0.01)；解毒活血方含药血清高剂量组(2.07±0.21)与病理模型组相比也显著降低(P＜0.05)。 培养上清液中内皮素-1含量：解毒活血方含药血清低剂量组(57.20±16.12)、解毒活血方含药血清高剂量组(42.97±5.58)与病理模型组(173.84±11.29)相比均显著降低(P＜0.01)。 4培养上消液中肿瘤坏死因子-α含最：解毒活血方含药血清低剂量组(0.58±0.03)与病理模型组(0.68±0.09)相比显著降低(P＜0.05)；解毒活血方含药血清高剂量组(0.43±0.04)与病理模型组相比也显著降低(P＜0.01)。 5 免疫细胞化学方法检测ICAM-1表达：解毒活血方含药血清低剂量组(0.446±0.020)、解毒活血方含药血清高剂量组(0.400±0.043)与病理模型组(0.507±0.064)相比均显著降低(P＜0.01)。 结论： 1.通过实验，证实在“解毒活血法”原则指导下选用的方药具有拮抗ox-LDL对血管内皮细胞功能损伤的作用。其机制可能与抗脂质过氧化、抑制或减少炎症因子的释放有关。从而为临床防治冠心病提供了理论和实验依据。 2.本实验为进一步证实热毒、瘀血是冠心病的主要病机奠定了理论和实验基础。 3.冠心病是多种因素综合作用的结果，本实验仅从抗炎、抗氧化、保护内皮细胞功能等角度探讨了“解毒活血法”防治CHD的作用机制，是否还有其它方面的作用机制，还需进一步探讨和完善。

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结果

附图

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讨论

结论

参考文献

综述 清热解毒法治疗冠心病的研究进展

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