乳腺良、恶性组织中p73α和14-3-3σ的表达及其与临床生物学行为关系的研究

摘要

目的：乳腺癌是严重威胁妇女健康的一种恶性肿瘤。据统计，全球每年约有120万～140万妇女患乳腺癌，约有50万患者死于该病。近年来，我国妇女乳腺癌的发病率以年增长3％的速度逐年递增。研究表明，乳腺癌的发生、发展是多步骤、多基因作用的结果。随着乳腺癌发病率的不断增加，对其易感基因、相关基因及其产物的研究已成为肿瘤学关注的热点问题。本研究采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技术和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(streptavidinperoxdase coniugated method，S-P)分别从转录水平和蛋白水平检测抑癌基因p73α和细胞周期负调节因子14-3-3σ在乳腺正常组织、癌旁组织和癌组织中的表达情况与相互作用；结合回顾性分析乳腺癌组织p73α和14-3-3σ的表达与其临床生物学行为的关系，为乳腺癌的早期发现和靶向治疗提供新的分子生物学指标和靶点。 方法：采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR.)技术和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(streptavidinperoxdase conjugated method，S-P)分别从转录水平和蛋白水平检测抑癌基因p73α和细胞周期负调节因子14-3-3σ在乳腺正常组织、癌旁组织和癌组织中的表达情况与相互作用，并回顾性分析乳腺癌组织p73α和14-3-3σ、组织学分级、腋淋巴结转移状况、有否脉管瘤栓、ER/PR、HER-2)的关系。结果： 1.p73α基因在乳腺正常组织、癌旁组织和癌组织中的表达1.1 p73α基因的mRNA水平表达 33例乳腺正常组织中，有25例p73α基因阳性表达，阳性率75.8％；33例癌旁组织中22例表达，阳性率66.7％；33例乳腺癌组织中20例表达，阳性率60.6％。乳腺正常组织、癌旁组织和癌组织中p73α基因的矫正值(p73a/GAPDH)分别为0.8378±0.5921、0.9199±0.8441和0.6150±0.3756，经过统计学处理，三组之间无统计学差异(F=1.139，p=0.326)。 1.2 p73α基因的蛋白表达33例乳腺正常组织中25例呈现p73α蛋白阳性表达，阳性率75.8‰33例癌旁组织中30例表达，阳性率90.9％；33例乳腺癌组织中10例表达，阳性率30.3％。经过统计学处理，三组中癌组织和癌旁组织、正常组织间蛋白表达有显著差异(x2= 17.860，p=0.000：x2=8.726，p=0.003)，而癌旁组织和正常组织间无统计学差异(x2=3.38 5,p=0.066)。 2.14-3-3σ在乳腺正常组织、癌旁组织和癌组织中的表达2.1 14-3-3σ的mRNA水平表达 33例乳腺正常组织中14-3-3σ全部表达；33例癌旁组织中32例表达，阳性率97.0‰33例乳腺癌组织中，33例表达，阳性率100％。乳腺正常组织、癌旁组织和癌组织中14-3-3σ矫正值( 14-3-3σ/GAPDH)分别为2.8231±0.1973、2.1950±0.1864和1.4680±0.0840。癌组织与癌旁组织、癌旁组织和正常组织之间14-3-3σ表达没有明显差异(p=0.075，p=0.123)；但癌组织中14-3-3σ基因表达水平明显低于乳腺正常组织，其差异有统计学意义(F=5.640，p=0.005)。 2.2 14-3-3σ的蛋白水平表达33例乳腺正常组织中18例强阳性表达，阳性率为54.5％；33例癌旁组织中1 1例强阳性表达，阳性率33.3％；33例乳腺癌组织中6例强阳性表达，阳性率18.2％。14-3-3σ的蛋白表达水平与细胞增殖呈负相关关系(r=-3.093，p=0.003)；其中，正常组织和癌组织、癌旁和癌组织之间表达水平有明显差异(χ2=14.029，p=0.000；χ2=6.344，p=0.012)，但正常和癌旁组织之间差异无统计学意义(χ2=2.752，p=0.097)。 3.p73α蛋白表达与临床参数的关系76例入组患者中，病理有脉管瘤栓组p73α蛋白表达阳性率为16.7％(4/24)，而无瘤栓组为40.4％(21/52)，有统计学差异(χ2=4.185，p=0.034)。ER阳性&PR阳性组患者中，p73α蛋白表达阳性率72.7％(16/22)，而ER阴性&PR阴性组中，阳性表达率为33.3％(8/24)，ER阳性＆PR阴性/ER阴性＆PR阳性组中仅1例表达阳性，占3.3％(1/30)，经过统计学分析，三组间两两比较均有显著差异(χ2=27.692，p=0.007)。p73α蛋白阳性表达与其他临床参数：临床分期(χ2=0.217，p=0.887)、有否腋淋巴结转移(χ2=0.007，p=0.564)、腋淋巴结转移数目(χ2=0.002，p=0.579)、肿瘤大小(χ2=0.953，p=0.329)、病理类型(χ2=1.907，p=0.167)、组织学分级(χ2=0.02，p=0.888)、HER-2过表达(χ2=1.93 1，p=0.126)无显著相关。 4 14-3-3σ蛋白表达与临床参数的关系随着组织学分级的增高，14-3-3σ蛋白表达强阳性率降低，两者呈负相关关系(r=-0.369，x2=6.133，p=0.013)；HER-2蛋白高表达(+++)者中，14-3-3σ蛋白表达强阳性率为16.8％(8/48)，低表达组中，14-3-3σ蛋白表达强阳性者为44.4％(12/28)，两组有统计学差异(x2=6.173，p=0，014)；14-3-3σ蛋白表达状况和病理组织学类型(x2=1.462，p=0.227)、有否腋淋巴结转移(x2=1.373，p=0.179)、腋淋巴结转移数目(x2=0.468，p=0.349)、有否脉管瘤拴(x2=1.684，p=0.154)、肿瘤大小(x2=1.317，p=0.251)、临床分期(x2=0.079，p=0.779)、雌孕激素受体状态(x2=0.044，p=0.834)之间的关系无统计学差异。 5 p53基因突变乳腺癌组织中14-3-3σ与p73α的相互关系76例乳腺癌患者中，p53蛋白表达阳性者45例，占59.2％。在45例p53基因突变乳腺癌中，p73α蛋白表达阳性且14-3-3σ表达阳性者占61.1％(11/18)，p73α蛋白表达阴性且14-3-3σ表达阴性者占78.6％(22/28)，两者呈正相关关系(r=0.384，x2=6.490，p=0.013)。 6 乳腺癌组织中p53与p73α蛋白表达的相互关系p53蛋白表达阳性组中，p73α蛋白阳性表达率为42.2％(19/45)，而p53蛋白表达阴性组中，p73α蛋白阳性表达率仅为19.4％(6/31)，两者呈正相关(r=0.239，x2=4.919，p=0.027)。 结论： 1.p73α基因在乳腺正常组织和良性组织中表达明显高于癌组织，p73α蛋白高表达与乳腺肿瘤组织脉管瘤栓呈负相关，且多见于ER阳性＆PR阳性患者。提示作为抑癌基因，p73α基因表达的衰减与乳腺肿瘤的形成和发展相关。 2 乳腺组织由正常到增生到癌变过程中，细胞周期负调控因子14-3-3σ强阳性表达呈衰减趋势，且与组织学分级、HER.2强阳性表达呈负相关，提示其可能为乳腺癌发生、发展中的重要抑制因子。 3.p53蛋白高表达和p73α基因阳性表达正相关，并且在p53基因突变乳腺癌组织中，p73α基因与14-3-3σ表达呈正相关关系，提示：当p53基因发生突变时，p73a基因表达增高，以替代p53上调下游因子14-3-3σ发挥抑制细胞增殖的作用。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述14-3-3σ蛋白与人类恶性肿瘤关系的研究进展

致谢

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