脆性组氨酸三聚体基因及错配修复基因hMLH1在口腔扁平苔藓中的表达及意义

摘要

目的：口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)是一种常见的口腔粘膜慢性炎症性疾病，其病因及发病机制不清。因其具有一定的恶变倾向，国际卫生组织己将其列为癌前病变。 脆性组氨酸三聚体(fragile histidine triad，FHIT)基因是近年来发现的一个抑癌基因。FHIT存在与于大多数正常组织，而在人类多种肿瘤细胞中呈现该基因的高频缺失和/或异常转录。目前在OLP中，FHIT基因的结构或表达异常国内外未见报道。 DNA错配修复系统(Mismatch repair，MMR)是人体细胞的一种能修复DNA碱基错配的安全保障体系，可保持遗传物质的完整性和稳定性，避免突变，保证DNA复制的忠实性。其中的hMLH1具有解旋及切除错配碱基的功能。 近年来研究认为，FHIT基因表达减低甚至缺失可能是错配修复基因改变的结果。那么FHIT与hMLH1在OLP的发展过程中是否有关? 本研究采用免疫组化的方法探讨FHIY,hMLH1在口腔扁平苔藓中的表达情况及其临床意义。 方法：选取存档的37例口腔扁平苔藓组织和29例正常口腔粘膜组织，分为试验组(OLP组)和对照组(NM组)。将每个蜡块切为4-5um的切片，共切4张，一张HE染色，一张阴性对照，其余2张分别行FHIT和hMLH1免疫组化染色。步骤如下：切片常规脱蜡至水；3％H2O2甲醇液振洗25分钟，以封闭内源性过氧化物酶；微波抗原修复，92-98℃修复15分钟，室温冷却：正常山羊血清封闭，37℃孵育30分钟；倾去血清，滴加-抗，4℃过夜；滴加生物素化二抗，37℃孵育25分钟；滴加辣根酶标记的链酶卵白素，37℃孵育20分钟；DAB显色后，苏木素复染，脱水，透明树脂封片。除血清封闭步骤外，其余各步骤后均以PBS振洗3～5分钟三次。分别用已知FHIT和hMLH1的口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)标本作为阳性对照。以PBS代替一抗作为阴性对照。 FHIT阳性结果判定：以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性，采用半定量积分法，即对每张切片的染色强度和染色范围分别进行分级计分，然后根据二者之积确定其阳性强度。染色强度为无染色或弱染色计为1分，中等强度计为2分，强染色计为3分；染色范围以阳性细胞率计分：＜10％为1分，10％-50％为2分，＞50％为3分。二者得分计为1-9，≤3分为不表达或弱表达(一)，＞3分为中等或高表达(+)。hMLH1阳性结果判定：以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性，每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，观察阳性细胞数，＜5％为阴性(一)，＞5％为阳性(+)。 用SPSS14.0统计软件进行统计分析，免疫组化结果用χ2检验。应用Spearman等级相关对FHIT、hMLH1表达情况的相关性进行分析，P＜0.05有统计学意义。 结果：1.在正常口腔粘膜组织中，FHIT蛋白的表达主要位于基底细胞层和棘层，也有少部分粒层出现FHIT蛋白的表达，且大多为强阳性染色，阳性细胞以上皮基底层较为密集，细胞核和细胞浆均有着色。在OLP组织中FHIT蛋白的表达主要位于细胞的胞浆，少部分呈现胞核着色。FHIT蛋白在OLP组织中的表达率为43.24％，而在正常口腔粘膜组织中的表达率为79.3％。试验组与对照组的表达率之间有显著性差异(P<0.05)。 2.在正常口腔粘膜组织中，hMLH1阳性细胞定位于胞浆，呈棕黄色颗粒，出现于大部分粘膜上皮，部分病例中同时出现胞核着色，呈现为核浆型。阳性细胞以上皮基底层密集且深染。在OLP组织中，hMLH1的表达主要位于细胞的胞浆内，少部分胞核也有表达，为棕黄色颗粒染色。hMLH1在OLP组织中的表达率为54.1％，在对照组的表达率为72.4％，而且多为强阳性表达，与试验组的阳性表达率之间无显著性差异(P>0.05)。同时经Spearman等级相关分析发现，在OLP组织中，hMLH1与FHIT的表达呈正相关(P<0.05)。 3.在OLP组织中FHIT及hMLH1的表达与患者的性别、年龄以及OLP的临床类型无明显相关性(P>0.05)。 结论：1.在正常口腔粘膜组织和OLP中，均有FHIT蛋白的表达。但在OLP中FHIT蛋白表达明显减低，提示FHIT在OLP的发展中发挥一定的作用。 2.在正常口腔粘膜组织和OLP中，均有hMLH1的表达，并且两者之间无显著性差异，提示hMLH1在OLP的发展中没有作用。 3.在OLP组织中，FHIT及hMLH1的表达与患者的年龄、性别及OLP的临床类型无关。 4.在OLP组织中，FHIT的表达与hMLH1的表达呈正相关性。关于hMLH1的改变引起FHIT异常的分子机制还有待与进一步研究。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述FHIT基因的研究进展

致谢

个人简历