多沙唑嗪光学异构体对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制的实验研究

摘要

血管平滑肌细胞（VSMCs）位于血管中膜，生理条件下，VSMCs通过收缩和舒张调节血管张力。VSMCs由中膜迁移到内膜下间隙并异常增殖是动脉粥样硬化（AS）、高血压和血管再狭窄（RS）等疾病共同的细胞病理基础之一。血管内皮细胞损伤导致多种炎症因子和生长调节因子的表达和激活紊乱，诱导VSMCs发生表型改变，刺激VSMCs从血管中膜向内膜下间隙迁移，发生过度增生和凋亡抑制，从而导致血管壁结构改变。因此，血管内皮细胞损伤、VSMCs增殖与迁移及其表型改变是目前研究新生内膜形成和再狭窄的热点。
　　 多沙唑嗪[（±）doxazosin]属长效α1受体阻断药，临床广泛用于治疗良性前列腺增生（BPH）并发下尿路症状（U5TS）；对于BPH/LUTS合并高血压的患者，应用（±）doxazosin可获得双重效果。近年来，国内外研究表明，（+）doxazosin具有抑制主动脉VSMCs增殖的作用，该抑制作用具有浓度依赖性和α1受体非依赖性等特点。
　　 本研究中，采用MTT比色法检测细胞增殖活性，采用流式细胞技术检测细胞增殖周期、凋亡率及凋亡蛋白（Bcl-2和Bax），探讨（-）doxazosin、（+）doxazosin和（+）doxazosin对体外培养大鼠主动脉VSMCs的增殖与凋亡的影响并分析其作用机制。
　　 第一部分多沙唑嗪光学异构体对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响及与α1受体相关性的实验研究
　　 观察（±）doxazosin及其光学异构体对大鼠VSMCs增殖的影响。在培养的大鼠主动脉VSMCs，采用MTT比色法检测细胞增殖活性，探讨（-）doxazosin、（+）doxazosin和（+）doxazosin的抗大鼠主动脉VSMCs的增殖作用以及与α1受体的相关性。
　　 1.(±）Doxazosin及其光学异构体对VSMCs增殖的影响。
　　 2.（±）Doxazosin及其光学异构体的非α1受体依赖性抗VSMCs增殖作用。
　　 3.（±）Doxazosin及光学异构体α1受体依赖性抗VSMCs增殖作用。
　　 第二部分多沙唑嗪光学异构体对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖周期和凋亡的影响
　　 本研究观察（±）doxazosin及其光学异构体对体外培养的大鼠胸主动脉VSMCs增殖周期和细胞凋亡的影响。应用Giemsa染色观察细胞形态学改变，采用FCM测定细胞周期、细胞凋亡率和凋亡蛋白（Bcl-2和Bax）。探讨（±）doxazosin及其光学异构体抗VSMCs增殖的机制。
　　 1.（±）Doxazosin及其光学异构体对VSMCs的形态学影响。
　　 2.（±）Doxazosin及其光学异构体对VSMCs细胞增殖周期的影响。
　　 3.（±）Doxazosin及其光学异构体对VSMCs凋亡率的影响。
　　 4.（±）Doxazosin及其光学异构体对VSMCs中Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。
　　 第三部分多沙唑嗪光学异构体对多种促增殖因子诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响
　　 本研究采用MTT比色法测定细胞增殖活性，观察了（±）doxazosin）及其光学异构体对血小板源生长因子（FDGF-BB）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、凝血酶和高糖诱导的大鼠主动脉VSMCs增殖的影响。
　　 1.（±）Doxazosin及其光学异构体对PDGF-BB诱发VSMCs增殖的影响。
　　 2.（±）Doxazosin及其光学异构体对AngⅡ诱发VSMCs增殖的影响。
　　 3.（±）Doxazosin及其光学异构体对凝血酶诱发VSMCs增殖的影响。
　　 4.（±）Doxazosin及其光学异构体对高糖诱发VSMCs增殖的影响。
　　 结论:
　　 1.（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin均可抑制10％小牛血清DMEM液中大鼠胸主动脉VSMCs的增殖反应；其中，（-）doxazosin的抑制作用明显强于（+）doxazosin，提示doxazosin在该培养条件下的抗VSMCs增殖作用具有手性药理学差异。
　　 2.除α1受体非依赖性抗VSMCs增殖作用以外，（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin也具有α1受体依赖性抗VSMCs增殖作用。
　　 3.（-）Doxazosin和（±）doxazosin抗大鼠胸主动脉VSMCs增殖的作用与其抑制G0/G1期细胞向S期转化以及降低细胞增殖指数有关；（+）doxazosin的对细胞周期的抑制作用显著弱于（-）doxazosin。
　　 4.（-）Doxazosin和（±）doxazosin具有诱导大鼠胸主动脉VSMCs凋亡的作用，该作用与其调控Bcl-2蛋白/Bax蛋白比值有关；提示（±）doxazosin诱导VSMCs凋亡的物质基础是其光学异构体（-）doxazosin而非（+）doxazosin。
　　 5.（±）Doxazosin）及其光学异构体对PDGF-BB、AngⅡ、凝血酶和高糖诱发大鼠主动脉VSMCs增殖反应具有显著的抑制作用。与小牛血清和苯肾上腺素诱发的VSMCs增殖反应相比，（±）doxazosin及其光学异构体对前四种促增殖剂的抑制作用更强，且未见明显的手性药理学差异。

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文摘

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引言

第一部分 多沙唑嗪光学异构体对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响及与α1受体相关性的实验研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 多沙唑嗪光学异构体对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖周期和凋亡的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 多沙唑嗪光学异构体对多种促增殖因子诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

综述 血管平滑肌细胞增殖与凋亡调控机制的研究进展

致谢

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