兔自体血红细胞回注关节对兔膝关节软骨影响的实验研究

摘要

目的:以体外分离的自体血红细胞进行大白兔膝关节腔内注射作为干预方式,分析红细胞对关节软骨的影响,以探讨红细胞对关节软骨损害的机制及与时间之间的关系,并分析其发生变化的原因,为临床对关节内出血的合理治疗提供理论基础。
　　 方法:
　　 1.选用新西兰大白兔18只,体重3.0±0.5kg。将18只实验动物均用3％戊巴比妥(30mg/kg)行耳轮静脉注射麻醉,然后从心包采自体静脉血4ml,离心后取自体血红细胞注入右侧膝关节腔内,作为实验组,左侧后膝关节作为空白对照组。于第4天将上述18只大白兔重复进行上述操作一次。再将18只动物随机分为3组,每组6只。分别于第2、5、8周进行实验。心包穿刺抽取全血6ml,加入抗凝剂,待分离血清,用于测定基质金属蛋白酶抑制剂-1和基质金属蛋白酶-3含量。抽血后立即处死动物,分别从右后膝关节(实验组)及左后膝关节(对照组)取材,取材位置为股骨内髁后部负重区的内缘与外缘中点。大体观察关节软骨的色泽、质地、光滑度,并做记录。去除多余软骨下骨,置入含有1％氯代十六烷基吡啶的10％中性福尔马林溶液固定48小时,用于组织切片。将股骨髁及胫骨平台锯下,置于密闭的操作箱内,切取关节软骨。一半用于含水率的测定,即软骨含水率:软骨组织在含P2O5的真空条件下进行干燥。软骨含水率=(软骨湿重-软骨干重)/软骨湿重×100％。一半用于胶原含量的测定。即采用生化比色法测定软骨胶原内羟脯氨酸的含量。
　　 结果:
　　 1.大体观察:正常对照组关节软骨表面光滑、均匀,有光泽,呈瓷白色;实验组关节软骨表面粗糙且色泽稍暗。
　　 2.HE染色。
　　 正常关节软骨表面光滑,软骨细胞分布均匀,无簇聚软骨细胞,潮线清晰完整。实验组兔关节软骨表面不光滑,可见细小碎屑。细胞排列也欠整齐,细胞分裂相增多,可见软骨细胞簇聚,潮线变模糊。
　　 3.过碘酸雪夫氏反应(PAS)染色。
　　 正常软骨PAS染色法中软骨组织基质中的中性粘多糖呈紫红色,软骨细胞内为无色。实验组2周标本中的紫红色减退,5周标本中的紫红色明显减退,8周时标本中的紫红色恢复正常;提示软骨基质组织中蛋白粘多糖丢失随时间延长而增多。
　　 4.Alcian Blue染色。
　　 正常软骨AB染色法中由于软骨组织基质中的酸性粘多糖软骨细胞周围呈深蓝色,基质则呈淡蓝色。实验组2周标本中的深蓝色也减退,5周标本中的深蓝色明显减退,8周时标本中的深蓝色恢复正常;提示软骨基质组织中软骨基质组织中硫酸软骨素丢失随时间延长而增多。
　　 5.兔血清中基质金属蛋白酶-3与基质金属蛋白酶抑制剂-1含量的改变:
　　 对照组兔血清基质金属蛋白酶-3与基质金属蛋白酶抑制剂-1含量在第2、5和8周均无显著性改变(P＞0.05)。实验组兔血清基质金属蛋白酶-3在第2和5周显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01);在第5周之前兔血清基质金属蛋白酶抑制剂-1的含量虽然有增高的趋势,但与对照组比并无显著性差异(P＞0.05)。
　　 6.兔关节软骨含水率的改变。
　　 对照组兔关节软骨的含水率在第2、5和8周均无显著性改变(P＞0.05)。与对照组相比,实验组兔关节软骨的含水率在第2和5周显著性升高(P＜0.05,P＜0.01),在第8周无显著性差异(P＞0.05)。
　　 7.兔关节软骨胶原蛋白含量的改变。
　　 对照组兔关节软骨胶原蛋白含量在第2、5和8周均无显著性改变(P＞0.05)。与对照组相比,实验组兔关节软骨胶原蛋白含量仅在第2周时显著降低,第5和8周胶原蛋白含量无显著差异(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 关节内出血模型能很好的模拟运动损伤或其它情况下关节内出血的病理状态,而短期内关节内红细胞对关节软骨造成一定程度的损害。因此,在条件允许的情况下,尽量进行穿刺,以减少血液对关节软骨的影响。

目录

文摘

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前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 关节软骨损伤修复研究新进展

致谢

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