膳食变化对大鼠下丘脑AgRP表达的影响

摘要

目的:随着社会经济和人们生活水平的提高,肥胖人群在健康人群中的比例逐年增加。随之而来的因肥胖引起的相关疾病如糖尿病、高血压、冠心病等也成为继肿瘤之后威胁人类健康的重要因素,近年来对肥胖的研究一直是医学领域的热点。本实验通过膳食变化建立大鼠的肥胖和饥饿模型,利用Western blot和免疫组化技术,检测大鼠下丘脑弓状核内刺鼠相关蛋白(Agouti-Related Protein AgRP)的表达,研究膳食变化对下丘脑AgRP表达的影响,探讨AgRP对肥胖发生的机制,为肥胖的研究提供一个新的思路。
　　 方法:1.将80只体重为100～120g的雄性Wistar大鼠适应性喂养一周后,随机分成高能饲料组(n=40)、饥饿组(n=20)、对照组(n--20)。1周后,高能组给予自制的高能饲料,对照组和饥饿组给予基础大鼠饲料。12周后,高能组体重超过对照组平均体重30％的大鼠设为膳食诱导肥胖(DIO)组,饥饿组给予72h禁食,自由饮水。按照Western blot(WB)和免疫组化实验要求常规取大鼠下丘脑,分别进行WB和免疫组化实验。2.WB实验,取每组大鼠下丘脑15例,称重后按每100mg组织加入200μl组织裂解液,冰上研磨成匀浆,低温(4℃)离心,12000rp/m,20min,取得蛋白样品。BCA法测细胞蛋白浓度,制备10％的浓缩胶和15％的分离胶,常规进行电泳、转膜、封闭、一抗、二抗孵育、显影,胶片经扫描仪扫描后获得图像。图像用Bandleader(3.0)软件进行灰度分析,统计采用SPSS11.5软件分析获得数据。3.免疫组化,取每组大鼠下丘脑5例,多聚甲醛固定12h后,常规进行石蜡包埋,切片(4-6μm)、脱蜡、抗原修复、一抗二抗孵育、DAB显色、脱水、中性树脂封片制成片子。图像采用ImagePro Plus6.0软件进行分析,采用SPSS11.5统计软件,获得数据。
　　 结果:1.高能饮食动物组约70％发展成DIO大鼠,DIO大鼠的摄入的热量明显超过对照组大鼠摄入的热量(P<0.005)2.Western Blot实验显示DIO组大鼠(0.99±0.01)和饥饿组大鼠(0.87±0.02)下丘脑AgRP表达明显高于对照组大鼠(0.67±0.01)P<0.01。而DIO组大鼠和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达无显著差异性。3.免疫组化显示DIO组大鼠(5531.10±330.40)和饥饿组大鼠(4901.67±410.24)下丘脑AgRP表达显著高于对照组(919.62±325.98)；而DIO组大鼠和饥饿组下丘脑AgRP表达无显差异性。
　　 结论:1.长期给予高能饮食可引起肥胖的发生,充分说明了在肥胖的发生过程中饮食结构导致肥胖的重要性。2.长期高能饮食导致肥胖,其下丘脑内AgRP表达的增高可能是导致机体摄食量和体重的增加并引起肥胖的主要因素之一。3.饥饿状态下,下丘脑内AgRP表达的增高,可能是由于在饥饿状态下机体内瘦素、胰岛素、糖的减少共同所致,需进一步研究。

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结果

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参考文献

综述 刺鼠相关蛋白(AgIRP)的研究进展

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